【摘 要】
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目的 从乳腺癌文库中钓取葡萄糖转运体基因12(glucose transporter 12 gene,GLUT12)全长编码序列,克隆至pCMV-Myc中,并在293T细胞中实现其真核表达,检测其对乳腺癌细胞葡萄糖
【机 构】
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贵州大学医学院,贵阳 550025;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京,100850
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目的 从乳腺癌文库中钓取葡萄糖转运体基因12(glucose transporter 12 gene,GLUT12)全长编码序列,克隆至pCMV-Myc中,并在293T细胞中实现其真核表达,检测其对乳腺癌细胞葡萄糖摄取功能的影响.方法 利用PCR法从乳腺文库中获得GLUT12编码区全长序列,将其以正确相位与pCMV-Myc载体中的Myc编码序列融合,将重组质粒转化E.coli DH5α后,通过限制性内切酶酶切和DNA测序等方法对重组质粒进行鉴定.将该重组质粒转染293T细胞,利用Western印迹法检测pCMV-Myc-GLUT12重组质粒的表达.在此基础上,检测GLUT12对乳腺癌细胞葡萄糖摄取功能的影响.结果 构建了GLUT12真核表达载体,经过酶切电泳和DNA测序,鉴定出插入序列正确的GLUT12表达载体,在真核细胞内实现其真核表达,表达产物能促进乳腺癌细胞对葡萄糖的摄取.结论 成功构建了GLUT12真核表达载体,在真核细胞中成功表达,表达产物具有生物学活性.
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