论文部分内容阅读
目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体.并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响.方法:利用软件根据Gs mRNA序列设计特异性siRNA序列.与GS真核表达载体CS-EGFP以LipofectamineTM 2000试剂联合转染Hela-G细胞,以GFP为指标鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列,将其定向克隆至真核表达载体pRNATH1.1/Neo中并转染至大鼠星形胶质细胞中,以免疫细胞化学方法鉴定GS的表达;通过免疫化学法对actin特异性染色分析GSRNA干扰后对星形胶质细胞黏附的影响.结果:GS siRNA能有效抑制GS-EGFP在Hela-G细胞中的表达:DNA测序证实合成并被克隆入真核表达载体pRNAT HI.1/Neo的siRNA插入序列完全正确,GS siRNA表达载体可特异性抑制星形胶质细胞中GS的表达;GS RNA干扰导致细胞黏附力显著降低.结论:成功构建大鼠GS siRNA真核表达载体.初步表明GS影响星形胶质细胞的黏附,为后期研究GS在巾枢神经系统损伤后反应性星形胶质细胞中的功能奠定了基础.