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摘要：目的 探讨清金化痰汤调节慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组与克拉霉素组，每组10只。除正常组外，其余3组均采用气管内注入脂多糖和烟熏复合法建立COPD模型，分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素灌胃，连续30 d。实验第31日，处死大鼠提取肺组织，每组随机选取6只，采用实时荧光定量PCR检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、表皮生长因子（EGFR）、黏蛋白5AC（MUC5AC）基因表达。结果 模型组大鼠肺组织NE、MUC5AC mRNA表达较正常组升高；与模型组比较，清金化痰汤组、克拉霉素组NE、MUC5AC mRNA表达均显著降低，清金化痰汤组NE、MUC5AC mRNA表达较克拉霉素组显著降低；清金化痰汤组EGFR mRNA表达较模型组显著降低。结论 清金化痰汤通过调节NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路，抑制气道黏液高分泌。
关键词：清金化痰汤；慢性阻塞性肺疾病；黏液高分泌；黏蛋白；中性粒细胞弹性蛋白酶；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.021
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0076-04
Abstract：Objective To investigate the action mechanism of Qingjin Huatan Decoction on regulating COPD rats with mucus hypersecretion in airway. Methods Fifty 6-8 week old Wistar male rats were randomly divided into healthy group， model group， Qingjin Huatan Decoction group， clarithromycin group， 10 rats in each group. Except for healthy group， all the other groups were used the combination method of injecting LPS and smudging to establish COPD models. The last three groups were fed with normal saline， Qingjin Huatan Decoction， clarithromycin respectively for 30 days. On the 31st day of the experiment， the rats were put to death to take lung tissue. 6 rats from each group were chosen randomly， and the protein expressions of NE， EGFR and MUC5AC mRNA in lung tissue were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results The expressions of NE， MUC5AC mRNA in lung tissue of COPD rats were higher than the healthy group. Compared with model group， the expressions of NE mRNA and MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group and clarithromycin group were markedly lower， while the expressions of NE， MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group were significantly lower than those in clarithromycin group. The expression of EGFR mRNA in Qingjin Huatan Decoction group was lower than that in model group. Conclusion Qingjin Huatan Decoction can inhibit mucus hypersecretion in airway through NE/EGFR/MUC5AC signal transduction pathway.
Key words：Qingjin Huatan Decoction；COPD；mucus hypersecretion；MUC5AC；neutrophil elastase；rats
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严重危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，据世界卫生组织估计该病是当前世界第4位疾病死亡病因。气道黏液高分泌是影响COPD病情和预后的独立危险因素。黏蛋白5AC（MUC5AC）是黏蛋白最重要的成分，COPD急性加重期（AECOPD）由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过度表达具有突出的病理意义。我们既往的研究表明，清金化痰汤可以显著缓解AECOP患者的临床症状，改善痰液性状，降低患者痰液中MUC5AC的表达[1]。本研究观察COPD模型大鼠肺组织表皮生长因子（EGFR）、MUC5AC、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）基因的表达，初步探讨清金化痰汤抗黏液高分泌的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
雄性清洁级Wistar大鼠50只，体质量（250±20）g，北京华阜康生物科技股份有限公司，动物许可证号SCXK（京）2009-0007。 1.2 药物
清金化痰汤（瓜蒌皮、黄芩、连翘、漏芦、浙贝母、清半夏、前胡、桔梗）等，免煎颗粒剂由北京康仁堂药业有限公司提供；克拉霉素片，丽珠集团制药厂，批号120201，0.25 g/片。
1.3 主要试剂与仪器
脂多糖（LPS，美国Sigma公司）；大前门牌香烟（上海卷烟厂）；Trizol RNA提取试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV逆转录酶购自Promega公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自BIO-RAD公司；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD公司）。气管插管针（16号静脉套管针），自制烟熏箱。
2 实验方法
2.1 造模
采用烟熏加气道内滴注LPS的复合方法复制AECOPD气道黏液高分泌模型[2]。LPS气道内滴入：于实验第1、14日气道内滴注浓度为1 mg/mL的LPS溶液0.2 mL。3.5%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，将大鼠仰卧位固定在鼠板上，头高尾低呈45°角放置，暴露声门，在光源下将套管针迅速插入大鼠气管内，拔出套管针钢芯，以棉丝放在塑料套管外口判断是否成功，插管成功后，先抽取空气0.3 mL后抽取LPS溶液0.2 mL，通过套管针快速注入气管，然后将大鼠固定板直立旋转，左右摇晃30次，使LPS液能均匀分布于双肺。实验第2-13日、15-30日给予烟熏，每次10只大鼠，用8支香烟，熏30 min，气道内滴注日不烟熏。
2.2 分组及给药
Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组，每组10只，饲养于二级动物室，将烟熏装置置于通风橱进行熏烟。实验动物每日给药量2.16 g/kg，相当于人临床用量的7倍。正常组正常饲养，其余3组分别给予生理盐水、清金化痰汤14 g/kg、克拉霉素83.3 mg/kg灌胃。每日1次，连续30 d。
2.3 标本采集
于实验第31日脱颈处死实验大鼠，取右上叶肺组织，液氮保存，匀浆提取RNA，在实验过程中各组均有死亡，每组随机取6只备检。
2.4 RT-PCR检测
2.4.1 总RNA提取 按照Trizol试剂说明，采用异硫氰酸胍一步法抽提组织总RNA，所提总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳确定其完整性，并经紫外分光光度计检测所提RNA含量和纯度。cDNA合成：分别取3 μg总RNA为模板，在加入Oligo（dT）和M-MLV反转录酶后以25 μL体系在42 ℃下反应1 h合成cDNA第一链，之后70 ℃加热5 min以灭活反转录酶。
2.4.2 RT-PCR扩增 采用SYBR Green Ⅰ荧光染料技术，在20 μL反应体系中，加入cDNA2 μL、ddH2O 7 μL、SYBR Green荧光定量PCR Mix 10 μL、引物1 μL：MUC5AC上游5'-CTGTGTCCATCTCAACCTTA-3'，下游5'- GCTGCCATCTATCCAATCA-3'，产物长度101 bp；EGFR上游5'-CATAGCAATGCGGTGAG-3’，下游5'-GAAGTCCTGCTG GTAGTCA-3'，产物长度144 bp；NE上游5'-AATGTGACA GTGGTGACTAA-3'，下游5'-GGCTGCGGATAATGGAAT-3'，产物长度232 bp；用β-actin基因作为内参，β- actin上游5'-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3'，下游5'- TTTAATGTCACGCACGATTTC-3'，产物长度150 bp。反应条件：94 ℃、10 min，94 ℃、10 s，55 ℃、10 s，72 ℃、10 s，共45个循环。同时做熔解曲线以确认是否是单一峰。反应结束后，通过琼脂糖凝胶电泳确认扩增产物是否符合原设计片段长度。PCR反应及数据采集在CFX-96系统上进行，记录其循环阈值（Ct），每个样品中靶基因的相对mRNA表达采用相对定量公式2-ΔΔCt计算，其中ΔCt值=靶基因Ct值-β-actin Ct值。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，多组间均数比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 总RNA提取
总RNA样品经琼脂糖凝胶电泳之后，紫外灯下观察可见18、28 s两条清晰的条带，未被降解。紫外分光比色测定显示，所有RNA样品在260、280 nm处A值之比均在1.8～2.0之间，纯度符合要求。
4.2 各指标熔解曲线与扩增曲线
各目标熔解曲线均为单一峰，扩增曲线均呈平行分布，见图1～图4。说明本实验引物设计成功，扩增产物特异性很好。
为了验证PCR所得产物与各目标的实际分子量是否相等，我们随机选取各2个目标PCR产物进行电泳分析，结果符合预期分子量，见图5。
4.3 清金化痰汤对大鼠肺组织弹性蛋白酶、表皮生长因子、黏蛋白5AC基因表达的影响
与正常组比较，模型组NE和MUC5AC目标基因的mRNA表达显著升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组和克拉霉素组比较，清金化痰汤组中3种目标基因的mRNA表达均降低（P<0.05，P<0.01）。克拉霉素组NE、MUC5AC mRNA表达较模型组显著降低（P<0.05）， EGFR mRNA表达与模型组、正常组比较明显升高（P<0.01）。结果见表1。
5 讨论
COPD属中医“肺胀”范畴，虚、痰、瘀邪贯穿疾病始终始终，痰既是主要病理产物又是关键致病因素。随着工业化的发展，环境污染的加剧，全球气温转暖，以及工作节奏的加快，生活水平的提高，饮食结构的改变，在AECOPD，痰邪最易从阳化热，痰热壅肺证在AECOPD占主导地位[3]。 气是维持生命的物质基础，升降出入是气运动的基本形式。“升降出入，无器不有”（《素问·六微旨大论篇》），在肺尤为重要，“肺气清肃，则周身之气莫不服从而顺利，肺气壅浊，则周身之气易致横逆而犯上”（《医门法律》）。肺主气，司呼吸，其病理表现主要是气机升降出入的失常，治疗肺系疾病的关键是调理气机的升降平衡。朱丹溪提出“善治痰者，不治痰而先治气”。北京中医药大学武维屏教授针对痰热壅肺证咳喘的治疗，提出以痰为辨证核心，抓住治痰与治气两个环节，立清热化痰与宣降肺气并重的清热化痰理气法，热清使痰无助长之因，痰消使热无孕育之源，顺肺脏之生理特点，宣降结合，使肺气畅达，给痰以清除之道，痰热皆除，逆气得降，气机通畅，则咳喘自止。
清金化痰汤原名蒌芩止嗽煎剂，是武维屏教授治疗痰热壅肺证咳嗽的经验方，方中瓜蒌皮、黄芩清热化痰，共为君药；漏芦、连翘清热解毒，浙贝母、清半夏化痰散结，四药相合，共为臣药；桔梗、前胡苦降辛开，宣降肺气，祛痰止咳，共为佐使。全方选药处处注意条畅气机，君臣佐使相互协调，共奏清热化痰、宣降肺气之功。
气道黏液主要由上皮杯状细胞、黏膜下腺体分泌物及组织漏出液构成，其黏弹性主要由杯状细胞和黏膜下腺体合成分泌的MUC所决定[4]。通过对COPD患者气道MUC分子表型的研究发现，由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过度表达在AECOPD具有突出的病理意义[5]。据报道，在所有刺激黏液生成和分泌的因素中，75%的作用由NE发挥，为目前已知最强促黏液分泌剂[6]。它呈时间依赖性增加气道MUC5AC mRNA的表达[7]。
EGFR信号转导通路是众多刺激因子如吸烟、过敏原、氧化应激、细菌感染、细胞因子等诱导MUC5AC基因表达的共同通路。在多种致病因素诱导气道上皮细胞合成MUC增加的过程中，EFGR活化发挥了分泌细胞膜受体作用靶点的中心调节作用。
清热化痰、宣降肺气是抗COPD黏液高分泌的重要治法[8]。体外实验研究结果显示，清热化痰、宣肺止咳的中药复方可以减少COPD模型大鼠气道杯状细胞的增生，红霉素和克拉霉素可使气道黏液中黏蛋白成分减少，克拉霉素能抑制细胞内信号通路分子ERK1/2磷酸化水平，从而减少了气道上皮细胞产生MUC5AC，由此发挥抑制气道黏液高分泌的作用[9-10]。本实验模型组大鼠肺组织中MUC5AC、NE mRNA表达与正常组比较显著升高，清金化痰汤组、克拉霉素组MUC5AC、NE mRNA表达均较模型组降低，清金化痰汤组MUC5AC、NE mRNA表达较克拉霉素组均降低。模型组EGFR mRNA表达与正常组比较无显著差异，清金化痰汤组EGFR mRNA表达较模型组降低，克拉霉素组EGFR mRNA表达较模型组升高。虽然模型组EGFR mRNA表达并未如理想中较正常组升高，但清金化痰汤组EGFR mRNA表达仍然较模型组显著降低。同时，实验结果表明，清金化痰汤对气道高分泌的干预效应优于克拉霉素组，显示了清金化痰汤在AECOPD抗黏液高分泌的优势。本实验结果显示，清金化痰汤可能通过NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路干预气道黏蛋白的高分泌，其作用机制有待进一步深入研究。
参考文献：
[1] 冯淬灵，于会勇，黄文通.清热化痰理气中药复方治疗65例急性加重期慢性阻塞性肺疾病疗效评价[J].北京中医药大学学报，2011，34（11）：786-790.
[2] 王骏，李春盈，刘治坤，等.慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌型大鼠模型的建立[J].心肺血管病杂志，2014，33（4）：592-595.
[3] 王至婉，李建生，余学庆，等.COPD急性加重期基础证及特征的临床调查研究[J].北京中医药大学学报，2010，33（10）：703-708.
[4] Kim KC， McCracken K， Lee BC， et al. Airway goblet cell mucin：its structure and regulation of secretion[J]. Eur Respir J，1997， 10（11）：2644-2649.
[5] 周向东，童瑾，兰箭.慢性阻塞性肺疾病患者气道黏蛋白分子表型的研究[J].中华呼吸和结核杂志，2002，25（7）：437.
[6] Hauber HP， Foley SC， Hamid Q， et al. Mucin overproduction in chronic inflammatory lung disease[J]. Can Respir J，2006，13（6）：327-335.
[7] Voynow JA， Young LR， Wang Y， et al. Neutrophil elastase increase MUC5AC mRNA and protein expression in respiratory epithelial cells[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，1999，276：835-843.
[8] 冯淬灵.清热化痰法抗慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌浅析[J].北京中医药大学学报，2007，30（增刊）：125-126.
[9] 罗琳，尤列·皮尔曼，维克多·科罗索夫，等.克拉霉素抑制气道黏液高分泌细胞内机制的研究[J].中国抗生素杂志，2011，36（8）：630-634.
[10] 于会勇，王成祥，刘治坤，等.解毒清肺合剂对慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热壅肺证模型大鼠气道杯状细胞的影响[J].中国中医药信息杂志，2012，19（8）：31-33.
（收稿日期：2015-01-22）
（修回日期：2015-02-10；编辑：华强）
关键词：清金化痰汤；慢性阻塞性肺疾病；黏液高分泌；黏蛋白；中性粒细胞弹性蛋白酶；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.021
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0076-04
Abstract：Objective To investigate the action mechanism of Qingjin Huatan Decoction on regulating COPD rats with mucus hypersecretion in airway. Methods Fifty 6-8 week old Wistar male rats were randomly divided into healthy group， model group， Qingjin Huatan Decoction group， clarithromycin group， 10 rats in each group. Except for healthy group， all the other groups were used the combination method of injecting LPS and smudging to establish COPD models. The last three groups were fed with normal saline， Qingjin Huatan Decoction， clarithromycin respectively for 30 days. On the 31st day of the experiment， the rats were put to death to take lung tissue. 6 rats from each group were chosen randomly， and the protein expressions of NE， EGFR and MUC5AC mRNA in lung tissue were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results The expressions of NE， MUC5AC mRNA in lung tissue of COPD rats were higher than the healthy group. Compared with model group， the expressions of NE mRNA and MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group and clarithromycin group were markedly lower， while the expressions of NE， MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group were significantly lower than those in clarithromycin group. The expression of EGFR mRNA in Qingjin Huatan Decoction group was lower than that in model group. Conclusion Qingjin Huatan Decoction can inhibit mucus hypersecretion in airway through NE/EGFR/MUC5AC signal transduction pathway.
Key words：Qingjin Huatan Decoction；COPD；mucus hypersecretion；MUC5AC；neutrophil elastase；rats
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严重危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，据世界卫生组织估计该病是当前世界第4位疾病死亡病因。气道黏液高分泌是影响COPD病情和预后的独立危险因素。黏蛋白5AC（MUC5AC）是黏蛋白最重要的成分，COPD急性加重期（AECOPD）由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过度表达具有突出的病理意义。我们既往的研究表明，清金化痰汤可以显著缓解AECOP患者的临床症状，改善痰液性状，降低患者痰液中MUC5AC的表达[1]。本研究观察COPD模型大鼠肺组织表皮生长因子（EGFR）、MUC5AC、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）基因的表达，初步探讨清金化痰汤抗黏液高分泌的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
雄性清洁级Wistar大鼠50只，体质量（250±20）g，北京华阜康生物科技股份有限公司，动物许可证号SCXK（京）2009-0007。 1.2 药物
清金化痰汤（瓜蒌皮、黄芩、连翘、漏芦、浙贝母、清半夏、前胡、桔梗）等，免煎颗粒剂由北京康仁堂药业有限公司提供；克拉霉素片，丽珠集团制药厂，批号120201，0.25 g/片。
1.3 主要试剂与仪器
脂多糖（LPS，美国Sigma公司）；大前门牌香烟（上海卷烟厂）；Trizol RNA提取试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV逆转录酶购自Promega公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自BIO-RAD公司；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD公司）。气管插管针（16号静脉套管针），自制烟熏箱。
2 实验方法
2.1 造模
采用烟熏加气道内滴注LPS的复合方法复制AECOPD气道黏液高分泌模型[2]。LPS气道内滴入：于实验第1、14日气道内滴注浓度为1 mg/mL的LPS溶液0.2 mL。3.5%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，将大鼠仰卧位固定在鼠板上，头高尾低呈45°角放置，暴露声门，在光源下将套管针迅速插入大鼠气管内，拔出套管针钢芯，以棉丝放在塑料套管外口判断是否成功，插管成功后，先抽取空气0.3 mL后抽取LPS溶液0.2 mL，通过套管针快速注入气管，然后将大鼠固定板直立旋转，左右摇晃30次，使LPS液能均匀分布于双肺。实验第2-13日、15-30日给予烟熏，每次10只大鼠，用8支香烟，熏30 min，气道内滴注日不烟熏。
2.2 分组及给药
Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组，每组10只，饲养于二级动物室，将烟熏装置置于通风橱进行熏烟。实验动物每日给药量2.16 g/kg，相当于人临床用量的7倍。正常组正常饲养，其余3组分别给予生理盐水、清金化痰汤14 g/kg、克拉霉素83.3 mg/kg灌胃。每日1次，连续30 d。
2.3 标本采集
于实验第31日脱颈处死实验大鼠，取右上叶肺组织，液氮保存，匀浆提取RNA，在实验过程中各组均有死亡，每组随机取6只备检。
2.4 RT-PCR检测
2.4.1 总RNA提取 按照Trizol试剂说明，采用异硫氰酸胍一步法抽提组织总RNA，所提总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳确定其完整性，并经紫外分光光度计检测所提RNA含量和纯度。cDNA合成：分别取3 μg总RNA为模板，在加入Oligo（dT）和M-MLV反转录酶后以25 μL体系在42 ℃下反应1 h合成cDNA第一链，之后70 ℃加热5 min以灭活反转录酶。
2.4.2 RT-PCR扩增 采用SYBR Green Ⅰ荧光染料技术，在20 μL反应体系中，加入cDNA2 μL、ddH2O 7 μL、SYBR Green荧光定量PCR Mix 10 μL、引物1 μL：MUC5AC上游5'-CTGTGTCCATCTCAACCTTA-3'，下游5'- GCTGCCATCTATCCAATCA-3'，产物长度101 bp；EGFR上游5'-CATAGCAATGCGGTGAG-3’，下游5'-GAAGTCCTGCTG GTAGTCA-3'，产物长度144 bp；NE上游5'-AATGTGACA GTGGTGACTAA-3'，下游5'-GGCTGCGGATAATGGAAT-3'，产物长度232 bp；用β-actin基因作为内参，β- actin上游5'-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3'，下游5'- TTTAATGTCACGCACGATTTC-3'，产物长度150 bp。反应条件：94 ℃、10 min，94 ℃、10 s，55 ℃、10 s，72 ℃、10 s，共45个循环。同时做熔解曲线以确认是否是单一峰。反应结束后，通过琼脂糖凝胶电泳确认扩增产物是否符合原设计片段长度。PCR反应及数据采集在CFX-96系统上进行，记录其循环阈值（Ct），每个样品中靶基因的相对mRNA表达采用相对定量公式2-ΔΔCt计算，其中ΔCt值=靶基因Ct值-β-actin Ct值。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，多组间均数比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 总RNA提取
总RNA样品经琼脂糖凝胶电泳之后，紫外灯下观察可见18、28 s两条清晰的条带，未被降解。紫外分光比色测定显示，所有RNA样品在260、280 nm处A值之比均在1.8～2.0之间，纯度符合要求。
4.2 各指标熔解曲线与扩增曲线
各目标熔解曲线均为单一峰，扩增曲线均呈平行分布，见图1～图4。说明本实验引物设计成功，扩增产物特异性很好。
为了验证PCR所得产物与各目标的实际分子量是否相等，我们随机选取各2个目标PCR产物进行电泳分析，结果符合预期分子量，见图5。
4.3 清金化痰汤对大鼠肺组织弹性蛋白酶、表皮生长因子、黏蛋白5AC基因表达的影响
与正常组比较，模型组NE和MUC5AC目标基因的mRNA表达显著升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组和克拉霉素组比较，清金化痰汤组中3种目标基因的mRNA表达均降低（P<0.05，P<0.01）。克拉霉素组NE、MUC5AC mRNA表达较模型组显著降低（P<0.05）， EGFR mRNA表达与模型组、正常组比较明显升高（P<0.01）。结果见表1。
5 讨论
COPD属中医“肺胀”范畴，虚、痰、瘀邪贯穿疾病始终始终，痰既是主要病理产物又是关键致病因素。随着工业化的发展，环境污染的加剧，全球气温转暖，以及工作节奏的加快，生活水平的提高，饮食结构的改变，在AECOPD，痰邪最易从阳化热，痰热壅肺证在AECOPD占主导地位[3]。 气是维持生命的物质基础，升降出入是气运动的基本形式。“升降出入，无器不有”（《素问·六微旨大论篇》），在肺尤为重要，“肺气清肃，则周身之气莫不服从而顺利，肺气壅浊，则周身之气易致横逆而犯上”（《医门法律》）。肺主气，司呼吸，其病理表现主要是气机升降出入的失常，治疗肺系疾病的关键是调理气机的升降平衡。朱丹溪提出“善治痰者，不治痰而先治气”。北京中医药大学武维屏教授针对痰热壅肺证咳喘的治疗，提出以痰为辨证核心，抓住治痰与治气两个环节，立清热化痰与宣降肺气并重的清热化痰理气法，热清使痰无助长之因，痰消使热无孕育之源，顺肺脏之生理特点，宣降结合，使肺气畅达，给痰以清除之道，痰热皆除，逆气得降，气机通畅，则咳喘自止。
清金化痰汤原名蒌芩止嗽煎剂，是武维屏教授治疗痰热壅肺证咳嗽的经验方，方中瓜蒌皮、黄芩清热化痰，共为君药；漏芦、连翘清热解毒，浙贝母、清半夏化痰散结，四药相合，共为臣药；桔梗、前胡苦降辛开，宣降肺气，祛痰止咳，共为佐使。全方选药处处注意条畅气机，君臣佐使相互协调，共奏清热化痰、宣降肺气之功。
气道黏液主要由上皮杯状细胞、黏膜下腺体分泌物及组织漏出液构成，其黏弹性主要由杯状细胞和黏膜下腺体合成分泌的MUC所决定[4]。通过对COPD患者气道MUC分子表型的研究发现，由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过度表达在AECOPD具有突出的病理意义[5]。据报道，在所有刺激黏液生成和分泌的因素中，75%的作用由NE发挥，为目前已知最强促黏液分泌剂[6]。它呈时间依赖性增加气道MUC5AC mRNA的表达[7]。
EGFR信号转导通路是众多刺激因子如吸烟、过敏原、氧化应激、细菌感染、细胞因子等诱导MUC5AC基因表达的共同通路。在多种致病因素诱导气道上皮细胞合成MUC增加的过程中，EFGR活化发挥了分泌细胞膜受体作用靶点的中心调节作用。
清热化痰、宣降肺气是抗COPD黏液高分泌的重要治法[8]。体外实验研究结果显示，清热化痰、宣肺止咳的中药复方可以减少COPD模型大鼠气道杯状细胞的增生，红霉素和克拉霉素可使气道黏液中黏蛋白成分减少，克拉霉素能抑制细胞内信号通路分子ERK1/2磷酸化水平，从而减少了气道上皮细胞产生MUC5AC，由此发挥抑制气道黏液高分泌的作用[9-10]。本实验模型组大鼠肺组织中MUC5AC、NE mRNA表达与正常组比较显著升高，清金化痰汤组、克拉霉素组MUC5AC、NE mRNA表达均较模型组降低，清金化痰汤组MUC5AC、NE mRNA表达较克拉霉素组均降低。模型组EGFR mRNA表达与正常组比较无显著差异，清金化痰汤组EGFR mRNA表达较模型组降低，克拉霉素组EGFR mRNA表达较模型组升高。虽然模型组EGFR mRNA表达并未如理想中较正常组升高，但清金化痰汤组EGFR mRNA表达仍然较模型组显著降低。同时，实验结果表明，清金化痰汤对气道高分泌的干预效应优于克拉霉素组，显示了清金化痰汤在AECOPD抗黏液高分泌的优势。本实验结果显示，清金化痰汤可能通过NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路干预气道黏蛋白的高分泌，其作用机制有待进一步深入研究。
参考文献：
[1] 冯淬灵，于会勇，黄文通.清热化痰理气中药复方治疗65例急性加重期慢性阻塞性肺疾病疗效评价[J].北京中医药大学学报，2011，34（11）：786-790.
[2] 王骏，李春盈，刘治坤，等.慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌型大鼠模型的建立[J].心肺血管病杂志，2014，33（4）：592-595.
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（收稿日期：2015-01-22）
（修回日期：2015-02-10；编辑：华强）