【摘 要】
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[目的]探讨缝隙连接蛋白43 (Cx43)在淫羊藿苷(ICN)诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.[方法]密度梯度离心法体外分离培养MSCs,取第三代细胞实验,流式细胞仪测定
【机 构】
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武汉市第四医院华中科技大学同济医学院附属普爱医院骨科,武汉,430034
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[目的]探讨缝隙连接蛋白43 (Cx43)在淫羊藿苷(ICN)诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.[方法]密度梯度离心法体外分离培养MSCs,取第三代细胞实验,流式细胞仪测定细胞表面标记物.实验分四组:(1)空白对照组,(2)成骨诱导组,(3)1-庚醇组,(4) ICN组.MTT检测不同时间点2.5 μmol/L 1-庚醇的细胞毒作用.分别用含0、10-9 mol/L ICN、10-gmol/L ICN+2.5 μmol/L 1-庚醇的成骨诱导液(ODM)诱导培养14d后,实时定量PCR检测各组成骨相关基因及Cx43的表达情况,Western blot检测MSCs成骨分化过程中Cx43蛋白的表达情况,碱性磷酸酶(ALP)定量测定各组细胞ALP含量.[结果]细胞高表达CD13、CD44,低表达CD14、CD45.2.5 μmol/L 1-庚醇对细胞没有明显的毒性抑制作用.ICN诱导14 d后Ⅰ型胶原、ALP、骨钙素(OCN)、RUNX2及Cx43的表达显著增加.2.5 μmol/L 1-庚醇干预后Ⅰ型胶原、ALP、RUNX2及OCN表达明显减弱,但仍高于空白对照组及成骨诱导组,其中Cx43的表达无明显变化.ALP定量分析结果显示ICN能促进ALP合成与分泌,其含量显著高于其他三组,但ICN的成骨诱导作用部分被1-庚醇所阻断.[结论]Cx43介导的缝隙链接细胞间通讯在ICN诱导成骨过程中起着很重要作用.
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