水牛IFN-γ成熟蛋白基因的原核表达及其产物多克隆抗体的制备

• 作 者: 徐贤坤 熊毅 龙剑明 刘棋 曾宪垠
• 机 构: 四川农业大学生命科学与理学院,四川雅安625014广西动物疫病预防控制中心,广西;广西动物疫病预防控制中心,广西南宁,530001;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005;四川农业大学生命科
• 出 处: 中国兽医科学
• 发表日期: 2008年11期
• 关键词: γ-干扰素成熟蛋白基因 大肠杆菌表达系统 水牛 多克隆抗体 BALB/c小鼠

将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达.应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行分离纯化,并采用ELISA和Western-blot试验鉴定重组蛋白的免疫活性.将可溶性纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,包涵体蛋白经SDS-PAGE分析后切取目的蛋白免疫小鼠以制备多克隆抗体.结果表明:重组菌经37℃0.5 mmol/L的IPTG诱导3 h,表达出43 ku的融合蛋白.目的蛋白的表达量达到菌体总蛋白量的30%,分别以可溶性和包涵体两种形式存在,而可溶性表达蛋白纯化后的纯度较高.获得的重组蛋白具有良好的免疫活性.均能从可溶性蛋白及包涵体蛋白免疫小鼠得到针对rGST-BoIFN-γ的特异性多克隆抗体.