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目的 研究9拷贝低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞转染人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因表达的调控作用.方法分离新生SD大鼠心肌细胞进行培养,将在HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞.心肌细胞分为8组,采用无血清培养基,分别在低氧(氧浓度5%)、正常氧(氧浓度21%)条件进行培养,取低氧/复氧不同时段的心肌细胞或培养液,采用细胞免疫荧光法、ELISA法分别测定心肌细胞及培养液中hVEGF165蛋白表达情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌细胞hVEGF165mRNA的表达.结果病毒转染率约为87%;转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P＜0.01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR结果亦显示,转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)可见484 bp目的条带.结论在低氧状态下,9拷贝HRE作为氧敏感调控开关,可促使心肌细胞转染的hVEGF165基因高度表达,而在复氧(正常氧浓度)状态下,hVEGF165因的表达即行中止。