【摘 要】
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为了达到提高重组人促红素(EPO)的聚乙二醇(PEG)化反应单取代率的目的,建立了一种EPO的连续PEG化反应方法。首先,对保存于4℃冰箱24个月的PEG-EPO反应液进行分析,结果表明其
【机 构】
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深圳赛保尔生物药业有限公司; 中山大学化学与化学工程学院;
【基金项目】
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深圳市2009-2011年度科技研发专项资金(No.JSA200903201157A)
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为了达到提高重组人促红素(EPO)的聚乙二醇(PEG)化反应单取代率的目的,建立了一种EPO的连续PEG化反应方法。首先,对保存于4℃冰箱24个月的PEG-EPO反应液进行分析,结果表明其具有很好的长期稳定性。同时,圆二色谱(CD)测试结果显示,EPO在不同的缓冲液体系中,其蛋白质二级结构特征略有不同。接着,在不改变缓冲液体系的情况下,进行了EPO的直接二次PEG化反应;另外,采用双缓冲液体系,进行EPO的二次PEG化反应。结果表明,一次PEG化反应得到的PEG-EPO反应液体系具有很高的稳定性,不能直接进行二次PEG化反应;应用双缓冲液体系,则可实现EPO的连续PEG化反应,所得PEG-EPO反应液的单取代率高于54%。最后,采用双缓冲液体系,成功地进行了EPO的连续3次PEG化反应。对纯化得到的单取代产物(monoPEG-EPO),进行了高效液相色谱、荧光光谱、电泳、唾液酸含量、体内活性以及PEG化修饰位点等测试。测试结果表明,EPO在经过连续3次PEG化反应后,仍然可以很好地保留其生物活性和蛋白质结构,同时其PEG化修饰位点也没有发生显著改变。这些研究结果为开发一种新型的高单取代率的EPO的PEG化反应方法提供了基础,有望降低PEG-EPO长效药物的制备成本。
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