【摘 要】
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背景:越来越多的证据显示,神经生长因子对神经元的存活、分化等有着重要的促进作用,但是神经生长因子半衰期短,稳定性较差,限制了它在临床上的广泛应用.目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞在可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架上向神经元细胞分化的可行性.方法:构建可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架和不含有神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架,将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种在两种支架表面,采用低糖DMEM完全培养基中加入碱性成纤维生长因子、脑源性神经营养因子以及
【机 构】
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东南大学医学院,江苏省南京市 210009;无锡市锡山人民医院骨科,江苏省无锡市 214105;无锡市锡山人民医院骨科,江苏省无锡市 214105;东南大学医学院,江苏省南京市 210009;东南大学
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背景:越来越多的证据显示,神经生长因子对神经元的存活、分化等有着重要的促进作用,但是神经生长因子半衰期短,稳定性较差,限制了它在临床上的广泛应用.目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞在可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架上向神经元细胞分化的可行性.方法:构建可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架和不含有神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架,将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种在两种支架表面,采用低糖DMEM完全培养基中加入碱性成纤维生长因子、脑源性神经营养因子以及N2和B27神经细胞生长添加剂的诱导方案进行成神经诱导分化.诱导18 d后,免疫荧光染色检测神经元标志物(微管相关蛋白2和巢蛋白)的表达,Western blot检测p-TrkA和p-ERK蛋白表达.结果 与结论:①经过连续18 d的诱导,免疫荧光检测显示微管相关蛋白2阳性细胞在空白支架组约为30％,可持续释放神经生长因子组约为70％,而巢蛋白阳性细胞在空白支架组为40％,可持续释放神经生长因子组约为60％,两组比较差异有显著性意义;②Western blot检测结果显示可持续释放神经生长因子组的p-TrkA和p-ERK蛋白表达量明显高于空白支架组,差异有显著性意义;③结果 表明,在持续性释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架表面,骨髓间充质干细胞可以更好地向神经元细胞分化,其机制可能是通过TrkA/ERK通路来实现的.
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