【摘 要】
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目的:建立了利用反相色谱(RP-HPLC)串联质谱对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定的方法.方法:采用RP-HPLC方法,色谱柱为Varian公司的PL
【机 构】
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中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室,北京100050
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目的:建立了利用反相色谱(RP-HPLC)串联质谱对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定的方法.方法:采用RP-HPLC方法,色谱柱为Varian公司的PLRP-S(50mm×2.1 mm,5μm,1 000 A);流动相A为50 mmol·L-1磷酸钠-1.5 mol·L-硫酸铵(pH 7.0);流动相B为75％ 50 mmol·L-1硫酸钠(pH 7.0)-25％异丙醇;梯度洗脱;柱温25℃;流速为0.8 mL·min-1;检测波长为280 nm.串联质谱对液相分离各组分进行定性分析.结果:所建立的RP-HPLC串联质谱分析方法可对各个峰组分进行定性定量,所测得的DAR为(4.0±0.1),标准差为2.5％.结论:基于PLRP-S色谱柱的RP-HPLC,无高浓度盐,不会对常规液相色谱系统造成污染,使用的是质谱兼容的流动相,能够兼顾质谱定性与液相定量,可用于基于半胱氨酸偶联的ADC的DAR测定.
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