p38α半胱氨酸点突变体真核表达载体的构建和表达

• 作 者: 岳军 齐素华
• 机 构: 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心
• 出 处: 实验室科学
• 发表日期: 2015年1期
• 关键词: p38α 真核表达载体 HEK293细胞 p38α eukaryotic expression vector HEK293 cell
• 基金项目: 江苏省高校自然科学研究计划（项目编号：13KJA310005,11KJB310012）, 2011年江苏省大学创新计划项目（项目编号：990）

以pFLAG-CMV-5.1-p38α为模板,应用PCR定点突变技术将p38α的第39、119、162和211位半胱氨酸（Cys）点突变体定点突变为丙氨酸（Ala）（C39A、C119A、C162A、C211A）,使用琼脂糖凝胶电泳及基因测序检测其结果;并采用脂质体转染法将p38α的野生型和突变体质粒分别转入HEK293细胞,免疫印迹鉴定野生型及其突变体p38蛋白表达。结果显示,构建的C39ApFLAG-CMV-5.1、C119ApFLAGCMV-5.1、C162ApFLAG-CMV-5.1和C211Ap