【摘 要】
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目的 建立登革1型病毒的快速特异的荧光定量PCR检测方法.方法 设计登革1型病毒特异的引物和TaqMan探针,制作标准曲线,并检测其特异性、重复性、再现性和敏感性,采用荧光定
【机 构】
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南方医科大学公共卫生与热带医学学院中心实验室,广东 广州 510515;广州市第八人民医院
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目的 建立登革1型病毒的快速特异的荧光定量PCR检测方法.方法 设计登革1型病毒特异的引物和TaqMan探针,制作标准曲线,并检测其特异性、重复性、再现性和敏感性,采用荧光定量PCR和常规PCR对临床标本进行检测比较.结果 成功构建了标准曲线,回归方程为Y=-3.41010gX +45.10,相关系数R2=0.999,扩增效率Eft =96.5％,灵敏度可达103copies/mL,此荧光定量PCR方法对登革1型病毒检测高度特异,与其他3型登革病毒和乙型脑炎病毒之间并无交叉反应；采用登革病毒种特异引物探针和本研究建立的登革1型病毒型特异引物探针对166份cDNA样本进行荧光定量PCR检测,均发现126份为阳性,阳性率均为75.9％,Ct值为20.84～36.36,浓度范围为1 ～1.3×104copy/μL;常规PCR方法检测到其中36份为阳性,阳性率为21.7％.结论 荧光定量PCR方法能够快速灵敏地检测登革1型病毒,并能实现对病毒滴度的绝对定量.
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