基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用

• 作 者: 吉玉辉 孙怀昌 张鑫宇 夏晓莉 夏兵
• 机 构: 扬州大学兽医学院
• 出 处: 中国兽医科学
• 发表日期: 2008年11期
• 关键词: ThyA^-大肠杆菌 染色体-质粒平衡致死系统 构建 应用 ThyA Escherichia coli chromosome-plasmid lethal b
• 基金项目: 江苏省科技攻关计划项目（BE2004611）,上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字（2005）第10-2号]

将大肠杆菌DH5α在含胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的琼脂平板上培养，获得了遗传稳定的ThyA大肠杆菌DH5α21株。用PCR扩增野生菌和ThyA大肠杆菌的thyA^-基因，将测定的序列与野生型thyA基因相比，6号突变株的thyA基因第92位碱基发生G→A转换，导致第31位甘氨酸被天冬氨酸替换，4、7和13号突变株的thyA基因从第73位连续缺失6个碱基，导致第25位甘氨酸和第26位苏氨酸缺失。经PCR扩增的包括启动子在内的鼠伤寒沙门菌thyA基因与野生型大肠杆菌DH5αthyA基因的同源性为86％。以