【摘 要】
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目的 探讨重组质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165体外转染对hBMSCs成骨诱导分化的影响.方法 构建hBMP-2和hVEGF165真核共表达载体.取健康成人自愿捐献的骨髓分离培养hBMSCs,采用阳离
【机 构】
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泸州医学院附属医院整形烧伤科,四川泸州,646000
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目的 探讨重组质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165体外转染对hBMSCs成骨诱导分化的影响.方法 构建hBMP-2和hVEGF165真核共表达载体.取健康成人自愿捐献的骨髓分离培养hBMSCs,采用阳离子脂质体将构建的质粒plRES-hBMP-2-hVEGF165、pIRES-hBMP-2、pIRES-hVEGF165和空质粒载体(pIRES-neo)转染至hBMSCs,作为A、B、C、D组;另取相同数量的未转染细胞作为对照组(E组).培养4周,采用RT-PCR检测hBMP-2、hVEGF165以及骨钙mRNA表达,Western blot检测细胞hBMP-2和hVEGF165表达,定量检测ALP活性,免疫组织化学方法检测Col Ⅰ表达.结果 与E组比较,A组hBMSCs高表达hBMP-2、hVEGF165、Col Ⅰ及骨钙素,B组大量表达骨钙素及Col Ⅰ,C组高表达hVEGF165而B组hVEGF165及C组hBMP-2和Col Ⅰ的表达与D、E组相似,呈阴性或仅有痕量表达.A、B、C、D及E组ALP活性分别为0.91±0.03、0.90±0.02、0.64±0.03、0.67±0.01、0.66±0.02,A、B组与E组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C、D、E组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组质粒通过阳离子脂质体能成功转染hBMSCs,外源性hBMP-2和hVEGF165基因在转染细胞中能持续表达,并能增强hBMSCs的成骨能力.
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