【摘 要】
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目的 研究微小RNA(miR-152)通过蜕膜NK细胞(decidual natural killer,dNK)分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)功能的影响.方法 为研究miR-152对人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)的调控作用
【机 构】
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西安市人民医院,西安市第四医院生殖医学中心,西安710004;西安医学院第一附属医院妇产科;空军军医大学唐都医院妇产科;西安市人民医院,西安市第四医院生殖医学中心,西安710004;西安医学院第一附属
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目的 研究微小RNA(miR-152)通过蜕膜NK细胞(decidual natural killer,dNK)分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)功能的影响.方法 为研究miR-152对人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)的调控作用,将人绒毛膜滋养细胞(HTR8)分为过表达组(转染miR-152 mimics)、抑制组(转染miR-152 inhibitor)、对照组(空白转染);实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测转染后miR-152及HLA-G在mRNA和蛋白水平的表达.为研究miR-152影响dNK分泌功能的可能方式,将从人正常早孕蜕膜中提取的dNK与转染miR-152 mimics及inhibitor的HTR8分组共培养,并在共培养过程中加入杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(killer Ig-like receptors,KIR2DL4)封闭剂以阻断HLA-G/KIR2DL4通路,并以KIR2DL4封闭剂对照物免疫球蛋白G1(immune gamma globulins,IgG1)作为封闭后对照,具体分组:空白共培养组、miR-152过表达共培养组、miR-152过表达对照组、miR-152抑制共培养组、通路封闭共培养组、通路封闭对照组.ELISA检测共培养24 h后上清中GM-CSF的表达;管样形成实验检测共培养上清对人脐静脉内皮细胞管样形成过程中总分支长度及管腔数的影响.结果 与对照组相比,过表达组miR-152在HTR8细胞中表达显著增高(P<0.01),抑制组中miR-152在表达显著降低(P<0.01).与对照组相比,过表达组HLA-G在mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.01),抑制组HLA-G在mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01).与空白共培养组相比,miR-152抑制共培养组上清中GM-CSF的浓度明显增高(P<0.01).与空白共培养组比较,通路封闭共培养组上清干预后HUVEC总分支长度及管腔数均明显降低(P<0.01),miR-152抑制共培养组上清干预后HUVEC总分支长度及管腔数均明显增高(P<0.01).结论 过表达miR-152能够影响dNK细胞分泌GM-CSF,从而抑制HUVEC成管能力.
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