【摘 要】
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目的:通过观察益肾通络方对膜性肾病大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨其对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的可能分子机制。方法:80只SD大鼠随机抽取20只设为正常组,其余大鼠均采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法制作膜性肾病大鼠模型。将模型复制成功的SD大鼠随机分为模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg-1)及益肾通络方低、中、高剂量组(6.61,13.22,26.44 g·kg-1
【基金项目】
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河北省自然科学基金项目（H2019423037）； 河北省重点研发计划项目（203777400）；
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目的:通过观察益肾通络方对膜性肾病大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨其对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的可能分子机制。方法:80只SD大鼠随机抽取20只设为正常组,其余大鼠均采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法制作膜性肾病大鼠模型。将模型复制成功的SD大鼠随机分为模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg-1)及益肾通络方低、中、高剂量组(6.61,13.22,26.44 g·kg-1),给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续灌胃4周。灌胃结束后,检测大鼠血浆白蛋白（ALB）,甘油三酯（TG）,胆固醇（TC）,血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,24 h尿蛋白（UTP）定量指标的变化;苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色、碘酸六胺银（PASM）染色及透射电镜下观测肾脏病理形态改变;免疫荧光法检测肾小球中免疫球蛋白（Ig）G和补体C3的沉积;免疫组化（IHC）法观察自噬标志蛋白Beclin-1,微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）,p62蛋白的表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腺苷酸活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高（P＜0.01）,血清中TG,TC水平显著升高（P＜0.01）,ALB水平显著下降（P＜0.01）;肾小球结构紊乱,体积增大,基底膜可见不同程度增厚和部分肾小管空泡样变性,大量胶原纤维和嗜复红蛋白沉积,足细胞足突广泛融合,肾小球毛细血管襻IgG和补体C3弥漫性沉积;自噬标志蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ表达显著降低（P＜0.01）,p62蛋白表达显著升高（P＜0.01）;磷酸化-腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白表达显著降低（P＜0.01）,磷酸化-雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）,磷酸化-Unc-51样激酶1（p-ULK1）蛋白表达显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,益肾通络方各剂量组、盐酸贝那普利组大鼠TG,TC,UTP水平均有不同程度降低（P＜0.05,P＜0.01）,ALB水平显著升高（P＜0.01）,血清SCr,BUN水平均差异无统计学意义;肾脏病理损害不同程度减轻;自噬标志蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ表达水平不同程度升高（P＜0.05,P＜0.01）,p62蛋白表达不同程度降低（P＜0.05,P＜0.01）;p-AMPK蛋白表达水平不同程度升高（P＜0.05,P＜0.01）,p-mTOR,p-ULK1蛋白表达水平不同程度降低（P＜0.05,P＜0.01）。结论:益肾通络方对膜性肾病大鼠具有肾脏保护作用,其机制可能与调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白的表达,激活自噬有关。
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