【摘 要】
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目的 探讨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)中BMP-2含量与其体内/外成骨活性的相关性,以期选择一种简易、便捷的评价DBM成骨活性的方法.方法 取9具人尸体左侧股骨
【机 构】
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常州市亘从生物力学研究中心 江苏常州213164;宁夏人体组织器官库 银川750004;上海亚朋生物技术有限公司 上海201201
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目的 探讨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)中BMP-2含量与其体内/外成骨活性的相关性,以期选择一种简易、便捷的评价DBM成骨活性的方法.方法 取9具人尸体左侧股骨中段组织,采用动态脱钙工艺制备DBM (S1～ S9),同时制备灭活DBM(对照).分别采用蛋白酶抑制剂法、胶原酶法、盐酸胍/EDTA法、RIPA裂解液法提取S1～S9以及灭活DBM中BMP-2,测量比较不同DBM间BMP-2含量差异.取S1～S9以及灭活DBM,分别与小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1共培养,采用MTT法及荧光染色检测细胞增殖,同时检测ALP活性.取30只BALB/c雄性裸小鼠分为10组,分别为S1～S9 DBM组(S1～S9组)以及灭活DBM组(对照组),每组3只.于各组小鼠双侧后肢大腿中部制备肌袋,植入对应DBM材料,术后4周取材行HE染色观察并半定量评价(新骨形成评分).结果 不同供体骨制备的DBM,其BMP-2含量存在差异;同一供体骨制备的DBM,经不同提取方法获得的BMP-2含量也不同,其中盐酸胍/EDTA法提取效率最高.体外成骨性能评价,共培养后各时间点S4、S6组细胞增殖、ALP活性均较其他组明显增高(P＜0.05),且7d时S4组细胞增殖最显著(P＜0.05);荧光染色示各组成骨细胞状态均良好,但S1、S2、S3、S4、S6组成骨细胞多于其他组.体内异位成骨诱导实验示,术后4周S1～S6组植骨区域均可见软骨和新骨生成,并且随着BMP-2含量增加,材料诱导新骨生成越多,新骨形成评分较高(P＜0.05);其中S4、S6组骨新生区域含有大量软骨细胞和成骨细胞.结论 BMP-2定量检测结合体外成骨细胞增殖分化实验可用于评估DBM成骨活性.
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