【摘 要】
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目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1
【机 构】
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第四军医大学唐都医院泌尿外科,第四军医大学基础医学院免疫学教研室,第四军医大学西京医院泌尿外科,
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目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。
OBJECTIVE: To investigate the effect of UHRF1 on the proliferation of 769-P cells by using small interfering RNA (siRNA) targeting plant homology domain and ring finger domain ubiquitin-like protein 1 (UHRF1) And the impact of apoptosis. Methods Two pairs of siRNA targeting UHRF1 were designed and synthesized based on the human UHRF1 mRNA sequence, and transiently transfected into 769-P cells by liposome. The level of UHRF1 mRNA was detected by real-time quantitative PCR, the protein level of UHRF1 was detected by Western blot, the proliferation of cells was detected by MTT assay, and the annexinⅤ-FITC / PI labeled with fluorescein isothiocyanate Staining combined with flow cytometry to detect apoptosis. Results UHRF1 siRNA could significantly inhibit the mRNA and protein level of UHRF1. After the level of UHRF1 in 769-P cells was down-regulated, the proliferation of cells was significantly weakened and the apoptosis of cells was significantly increased. Conclusion Down-regulation of the expression of UHRF1 can inhibit the proliferation and promote the apoptosis of renal cell carcinoma.
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