【摘 要】
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目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株(BT5
【机 构】
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重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆 400016;重庆医科大学基础医学实验教学中心,重庆 400016
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目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株(BT549和MDA-MB-231)以及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中miR-4719和ARHGAP36的表达水平.生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因.将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞.Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区(3'-UTR)直接结合.结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞(P<0.01)中显著降低和增高.miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关(P<0.01).过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移(P<0.01).乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关(P<0.01),双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达(P<0.01),向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达(P<0.01).此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.01).结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭.
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