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摘要：文章介绍了薄层色谱法对火灾现场物证定性的主要影响因素及相应的处理方法，同时，给出了实验过程中应注意的基本问题。
关键词：薄层色谱法；影响因素；处理方法
一、引言
薄层色谱法（TCL）也叫薄层层析法，通常将吸附剂（载体）铺在光洁的表面上（玻璃板、金属或塑料等），形成均匀的薄层，然后在薄层一端点上待分离的样品溶液，待试样溶液挥发后，以流动相展开，样品中的组分不断地被吸附剂（固定相）吸收，又被流动相溶解（吸收）而向前移动，由于吸附剂对不同组分有不同的吸附能力，流动相有不同的解吸能力，因此，在流动相向前流动过程中，不同组分移动的距离不同，因而得到分离。样品通过薄层分离，并用适当方法定位后的斑点，常用测定斑点的比移值（Rf值）以及不同斑点的显色特征，对被分离的物质进行定性。
在火灾原因鉴定工作中，薄层色谱法已发挥了重要作用。薄层色谱法对火场物证进行定性分析主要包括样品提取及预处理、点样、展开、显色等四个步骤，其中每个步骤对最终定性的结果都有不同程度的影响，下面就其主要影响因素作简要分析。
二、样品提取及预处理
样品提取及预处理，就是将火场中有可能含有易燃液体成分及其烧后成分的相关证据，采用分离、擦拭等方法提取，并将提取后的物品用有机溶剂提纯、浓缩成分析样品的过程。火场物证、易燃液体原成分、模拟实验得到的烟尘等是样品的主要来源，其中易燃液体原成分常用作随行样品可直接进行点样，一般不必预处理，而火场物证、模拟实验得到的烟尘等这些物品则需经有机溶液提纯、浓缩后，才可用作分析样品。
火场物证的提取要及时、全面、科学。若火场物证选取不及时，则物证中的一些关键成分会降低，甚至消失，致使检验失败；若提取物证不全面，则不能充分说明火灾发生的真实情况；若提取方法不科学，则很难达到化验分析的目的；这些因素都将直接影响到对火灾原因鉴定的准确性。因此火灾发生后，火调人员应及时赶赴现场，通过四项勘查准确确定起火点，然后再以起火点为中心，全面、科学地提取相关物证，将其用无污染的塑料袋或玻璃容器封闭保存，并及时进行预处理。在预处理过程中应采用同一厂家同一批次的单一有机溶剂对火场物证及参照样品进行处理，这样可以减少因溶剂带来的不必要的影响。
三、点样
因为火灾原因鉴定采用薄层色谱法主要是进行定性分析，根据检验需要及多年实践经验，目前大多选用硅胶预制薄层板（以下均以硅胶预制薄层板为例说明），并采用点状点样法进行点样。
点样前，应将薄层板在紫外光及日光下检查板面有无损坏或污染，必须选择合格的薄层板进行点样。
点样时所使用的微量注射器或毛细管管口必须平整，点样时应轻轻接触层面，避免破坏层面结构，影响分析效果。样品点样原点必须在与薄层板底端平行的起始线（是一条直线）上，起始线距底边的距离约为1cm-1.5cm，原点间距为1cm-2cm，不宜过大或过小，原点不得靠近薄层板边缘。另外进行多个样品点样时，每点完一个样品，都应将微量注射器或毛细管清洗干净，避免交叉污染，影响鉴定结果的准确性。点样时，原点直径不宜过大，一般为3mm较为合适，原点过大会降低分辨率及分离度。同时应尽可能地避免多次点样，一方面是为了降低破坏薄层板面的几率，另一方面是为了提高斑点的分离度。
点样体积一般为1ul-5ul，点样体积过少，检出量小，灵敏度降低；点样体积过多，则会造成斑点拖尾或重叠，降低准确度。因此应控制好点样体积。
点样是薄层色谱法中比较关键的步骤，操作时应注意上述因素的影响，尽量减少人为误差，不要因为色谱分离最初行为的差异而导致最终分离的失败。
四、展开
展开是薄层色谱法对样品定性最为关键的一步。如果实验条件完全一致，Rf值应该是组分的定性技术参数，但事实上由于影响因素很多，故Rf值不是一个稳定的数值，只有在已知对照品随行并用不止一种展开剂进行展开后，被分离组分的Rf值与对照品完全一致时，才可作为定性指标之一。在火灾原因鉴定工作中主要是对汽油、煤油、柴油等易燃物品的检验，被分离物质的极性、固定相的吸附活度和展开剂的极性既相互关联又互相制约，只有处理好这三者的关系，才能使样品组分得到很好的分离效果，因此展开剂的选择对样品的分离、定性起到了决定性作用。展开剂最好用单一溶剂，但火场物证经处理后的样品多为复杂的混合物，单一溶剂往往达不到理想的效果，因此常用三角形法、点滴试验法等方法选择最佳的展开剂，展开后组分的Rf值应为0.15-0.8，最好是在0.4-0.5左右，否则应改选其他更合适的展开剂。
薄层层析多以上行展开方式进行展开。展开时，应将点样后的薄板点样端水平浸入层析缸的展开剂中，板与水平面成10°-20°角，使展开剂浸入薄层约0.3cm-0.5cm，点样处切不可浸入展开剂中。为了增加分离效果，多采用双向展开技术，这样可以使成分复杂的样品得到更充分的分离，使定性更为准确。
五、显色
显色时，多采用紫外光照射、碘蒸汽熏蒸、溶剂浸渍等方法进行，实验时应按照上述顺序进行，否则会造成样品中关键成分的流失，同时要准确记录实验过程中出现的各类斑点位置，正确记算各特征斑点的Rf值，并与随行样品进行参比对照，为火灾原因定性提供科学的证据。
六、结论
影响薄板色谱法对火场物证定性的因素很多，也很复杂，若该法与气相色谱法、紫外光谱法等方法联合使用，进行多元检测，则会更加提高对火场物证定性的准确性，这是火灾原因分析鉴定发展的一个必然趋势。
（作者单位：海南省三亚市消防支队防火监督处）
关键词：薄层色谱法；影响因素；处理方法
一、引言
薄层色谱法（TCL）也叫薄层层析法，通常将吸附剂（载体）铺在光洁的表面上（玻璃板、金属或塑料等），形成均匀的薄层，然后在薄层一端点上待分离的样品溶液，待试样溶液挥发后，以流动相展开，样品中的组分不断地被吸附剂（固定相）吸收，又被流动相溶解（吸收）而向前移动，由于吸附剂对不同组分有不同的吸附能力，流动相有不同的解吸能力，因此，在流动相向前流动过程中，不同组分移动的距离不同，因而得到分离。样品通过薄层分离，并用适当方法定位后的斑点，常用测定斑点的比移值（Rf值）以及不同斑点的显色特征，对被分离的物质进行定性。
在火灾原因鉴定工作中，薄层色谱法已发挥了重要作用。薄层色谱法对火场物证进行定性分析主要包括样品提取及预处理、点样、展开、显色等四个步骤，其中每个步骤对最终定性的结果都有不同程度的影响，下面就其主要影响因素作简要分析。
二、样品提取及预处理
样品提取及预处理，就是将火场中有可能含有易燃液体成分及其烧后成分的相关证据，采用分离、擦拭等方法提取，并将提取后的物品用有机溶剂提纯、浓缩成分析样品的过程。火场物证、易燃液体原成分、模拟实验得到的烟尘等是样品的主要来源，其中易燃液体原成分常用作随行样品可直接进行点样，一般不必预处理，而火场物证、模拟实验得到的烟尘等这些物品则需经有机溶液提纯、浓缩后，才可用作分析样品。
火场物证的提取要及时、全面、科学。若火场物证选取不及时，则物证中的一些关键成分会降低，甚至消失，致使检验失败；若提取物证不全面，则不能充分说明火灾发生的真实情况；若提取方法不科学，则很难达到化验分析的目的；这些因素都将直接影响到对火灾原因鉴定的准确性。因此火灾发生后，火调人员应及时赶赴现场，通过四项勘查准确确定起火点，然后再以起火点为中心，全面、科学地提取相关物证，将其用无污染的塑料袋或玻璃容器封闭保存，并及时进行预处理。在预处理过程中应采用同一厂家同一批次的单一有机溶剂对火场物证及参照样品进行处理，这样可以减少因溶剂带来的不必要的影响。
三、点样
因为火灾原因鉴定采用薄层色谱法主要是进行定性分析，根据检验需要及多年实践经验，目前大多选用硅胶预制薄层板（以下均以硅胶预制薄层板为例说明），并采用点状点样法进行点样。
点样前，应将薄层板在紫外光及日光下检查板面有无损坏或污染，必须选择合格的薄层板进行点样。
点样时所使用的微量注射器或毛细管管口必须平整，点样时应轻轻接触层面，避免破坏层面结构，影响分析效果。样品点样原点必须在与薄层板底端平行的起始线（是一条直线）上，起始线距底边的距离约为1cm-1.5cm，原点间距为1cm-2cm，不宜过大或过小，原点不得靠近薄层板边缘。另外进行多个样品点样时，每点完一个样品，都应将微量注射器或毛细管清洗干净，避免交叉污染，影响鉴定结果的准确性。点样时，原点直径不宜过大，一般为3mm较为合适，原点过大会降低分辨率及分离度。同时应尽可能地避免多次点样，一方面是为了降低破坏薄层板面的几率，另一方面是为了提高斑点的分离度。
点样体积一般为1ul-5ul，点样体积过少，检出量小，灵敏度降低；点样体积过多，则会造成斑点拖尾或重叠，降低准确度。因此应控制好点样体积。
点样是薄层色谱法中比较关键的步骤，操作时应注意上述因素的影响，尽量减少人为误差，不要因为色谱分离最初行为的差异而导致最终分离的失败。
四、展开
展开是薄层色谱法对样品定性最为关键的一步。如果实验条件完全一致，Rf值应该是组分的定性技术参数，但事实上由于影响因素很多，故Rf值不是一个稳定的数值，只有在已知对照品随行并用不止一种展开剂进行展开后，被分离组分的Rf值与对照品完全一致时，才可作为定性指标之一。在火灾原因鉴定工作中主要是对汽油、煤油、柴油等易燃物品的检验，被分离物质的极性、固定相的吸附活度和展开剂的极性既相互关联又互相制约，只有处理好这三者的关系，才能使样品组分得到很好的分离效果，因此展开剂的选择对样品的分离、定性起到了决定性作用。展开剂最好用单一溶剂，但火场物证经处理后的样品多为复杂的混合物，单一溶剂往往达不到理想的效果，因此常用三角形法、点滴试验法等方法选择最佳的展开剂，展开后组分的Rf值应为0.15-0.8，最好是在0.4-0.5左右，否则应改选其他更合适的展开剂。
薄层层析多以上行展开方式进行展开。展开时，应将点样后的薄板点样端水平浸入层析缸的展开剂中，板与水平面成10°-20°角，使展开剂浸入薄层约0.3cm-0.5cm，点样处切不可浸入展开剂中。为了增加分离效果，多采用双向展开技术，这样可以使成分复杂的样品得到更充分的分离，使定性更为准确。
五、显色
显色时，多采用紫外光照射、碘蒸汽熏蒸、溶剂浸渍等方法进行，实验时应按照上述顺序进行，否则会造成样品中关键成分的流失，同时要准确记录实验过程中出现的各类斑点位置，正确记算各特征斑点的Rf值，并与随行样品进行参比对照，为火灾原因定性提供科学的证据。
六、结论
影响薄板色谱法对火场物证定性的因素很多，也很复杂，若该法与气相色谱法、紫外光谱法等方法联合使用，进行多元检测，则会更加提高对火场物证定性的准确性，这是火灾原因分析鉴定发展的一个必然趋势。
（作者单位：海南省三亚市消防支队防火监督处）