【摘 要】
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目的 建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平.方法 参照Gen
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院四川省食品安全监测与风险评估重点实验室,成都610041国家食品安全风险评估中心卫生部食品安全风险评估重点实验室,北京 100021;
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目的 建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平.方法 参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体系,建立实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR检测体系.结果 建立的HEV实时荧光RT-PCR检测方法的灵敏度为19.9拷贝/μL,扩增效率92.9％ ～ 109.1％,与札如病毒(Sa)、诺如病毒(Nov)、甲肝病毒(HAV)均不发生交叉反应.荧光RT-PCR检测猪粪便样本342份,其中HEV阳性样本210份,阳性率61.4％,育肥前阳性率56.6％,育肥后阳性率66.9％,育肥前后样本阳性率差异具有统计学意义(x2=24.8,P＜0.05);经基因分型鉴定体系测定阳性毒株基因型均为HEV-4型,且存在4b、4d、4h三种基因亚型.结论 中国部分省市猪场中HEV感染普遍,基因型均为HEV-4型,各省市猪场感染率和基因亚型存在差异.
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