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海洋生物因其生存环境不同而蕴藏着许多结构独特、功能各异的活性物质。海洋生物活性肽具有多种生物学功能，如抗氧化、抗炎症、抗癌、抗高血压、抗菌等。该研究对海洋生物活性肽抗氧化性的构效关系、检测方法等研究现状进行综述，并且对其应用和研究前景进行展望。
关键词海洋生物活性肽；抗氧化；构效关系；检测方法
中图分类号S986.2文献标识码A文章编号0517-6611（2015）25-015-06
Abstract Marine organisms contain many different structure and functional components because of theirs unique living environment. Bioactive peptides have many biological functions， such as antioxidation， antiinflammatory， anticancer， antihypertensive， antibacterial， etc. In this paper， the production and structureactivity relationship of marinederived antioxidant peptides were reviewed， and their application and research prospect were forecasted.
Key words Marine bioactive peptides； Antioxidant； Structureactivity relationship； Detection method
生物活性肽（Bioactive peptide）具有特殊的生物活性和生理功能，如抗氧化、抗血栓、抗高血压、抗病毒、抗癌、降胆固醇、抑菌、免疫调节等。与氨基酸相比，小肽可以被人体更好地吸收和利用。因此，生物活性小肽不仅是筛选药物的天然资源宝库，而且是功能性食品工业的主要原料成分[1]。
海洋生物资源约占全球生物总量的一半。海洋生物因其生存环境的不同在进化的过程中形成许多结构新颖、功能多样的活性物质。海洋蛋白质资源无论在种类还是在数量上都远大于陆地，所以海洋生物活性肽具有很大的开发潜力。目前研究主要关注如何提高未被利用或未被充分利用的鱼类及其加工副产物的附加值。其中，从鱼类肌肉和加工副产物水解产生的抗氧化活性肽已经成为替代化学合成抗氧化剂的主要来源。
1氧化损伤与抗氧化剂
人体衰老和一些氧化应激相关疾病如炎症、糖尿病、心血管疾病和癌症等都与体内自由基造成细胞的氧化损伤相关。自由基是独立存在的、外层轨道上带有一个或一个以上未配对电子的原子、原子团或分子，其特点为活性高、不稳定。在机体内，过多的自由基可损伤生物大分子，影响细胞的正常结构和功能。活性氧在生物体内的新陈代谢过程中会产生过氧离子（O2·-）和羟基自由基（·OH），使得酶不可逆地活化，造成对细胞的损伤。自由基可以攻击DNA、蛋白质、脂类等大分子，从而加速机体的衰老，致使糖尿病、心血管疾病和癌症等的发生。
人体可以通过以下5种形式有效地降低体内自由基水平，防止脂质过氧化，帮助机体抵御疾病：①供氢还原；②直接清除或淬灭活性氧自由基，如O2·-、·OH、ROO·、RO·等；③在脂质颗粒外围形成保护膜，阻抑脂质氧化引发剂的渗透和扩散；④螯合过渡金属离子，减少氧化酶的配体，降低酶活性；⑤激活机体本身内在的抗氧化防御蛋白和酶的表达，如铁蛋白、血红素氧合酶（HO1）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）等，减少ROS和丙二醛（MDA）的生成。目前，应用较多的是一些人工合成类抗氧化剂，如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）、特丁基对苯二酚（TBHQ）、没食子酸丙酯（PG）等。由于它们本身有一定的毒副作用，这些抗氧化合成物用量需严格控制。开发天然抗氧化剂逐渐成为一种必然趋势。
抗氧化活性肽是一种具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基功效的生物活性肽。由于肽类的两亲性，它们不仅在油溶体系中有良好的增效作用，而且在水溶体系、乳化体系及干基体系中有较高的抗氧化活性，所以其应用广泛。生物体内天然存在的抗氧化肽类主要为肌肽和谷胱甘肽，但这些肽类在天然原料中存在的含量较低，分离、纯化困难。研究证明，蛋白酶水解产生的肽具有一些蛋白质无法比拟的两性性质和结构灵活性。所以，近年来利用蛋白酶来水解海洋生物蛋白，例如从鱼类、蓝贻贝、乌贼、虾类、康吉鳗、海绵、海鞘、芋螺、海葵、海星、海藻、海兔等蛋白获得许多抗氧化肽。
2海洋生物源抗氧化活性肽的生产
目前，生物活性肽的制备技术主要包括微生物发酵和蛋白酶水解。微生物发酵生产生物活性肽主要是通过微生物内源性蛋白酶的作用。发酵除产生一些生物活性肽之外，还赋予产品独特的风味和质构。通过发酵紫贻贝获得具有较高抗氧化活性的小肽FGHPY[1]。
蛋白酶水解不仅可使一些过敏源蛋白降低或消除致敏性，而且是目前制备活性肽的主要技术（表1）。根据生物活性肽的构效关系，选择蛋白酶种类，可制备特定结构的生物活性肽。目前，在蛋白酶水解体系中采用的蛋白酶主要有工业食品级蛋白酶，如碱性蛋白酶[21-22，30-33]；微生物来源的复合蛋白酶，如protamex[10]、Orientase[13]、Protease XXIII[23]、subtilisin[28-34]等；植物来源的蛋白酶，如木瓜蛋白酶[12，15，29，32，35]；动物来源的蛋白酶，如胃蛋白酶[2-3，6-10，27，36]、胰凝乳蛋白酶[6，8]和胰蛋白酶[4-6，18，25-26]等。其中，使用较多的为胃蛋白酶和胰蛋白酶。主用考虑因素为这些酶获得生物活性肽能够耐受体内消化酶的降解，提高其在体内的生物利用度，并且能够通过体外试验结果预测体内的功能特性。现有海洋生物源抗氧化活性肽的制备蛋白来源广泛，主要来自于海洋动物，如日本对虾[2]、鱼类[4-5，8-10，12-15，17-24，26-27，29-33，35]、牡蛎[6，28，34]、蛤[25]和紫贻贝[37]等以及海洋藻类[3，11，16]和微生物[7，36]。已产生、获得的抗氧化活性肽种类繁多，从二肽到十六肽，其抗氧化作用主要通过供氢还原[2]、清除活性氧自由基[4-9，11-18，21-37]、提高氧化防御蛋白和酶的表达、减少活性氧的形成[21-22，31]、抑制脂质氧化[10，14，19-20]等抗氧化途径完成。 此外，还有定向合成法（主要包括化学合成、酶法合成、DNA重组技术等）以及从微生物、动植物体内直接提取分离纯化法[38]等。合成法受设备投资大、产品成本高等条件的限制，当前其技术成熟度仅限于小分子寡肽的合成；因天然生物资源中功能肽的含量极低，直接提取法成本较高，目前虽有一些商品化的天然功能性肽，但难以大规模推广。因此，蛋白酶水解法仍是目前生物活性肽生产的最主要方法。
3生物活性肽的抗氧化机制
目前，已经开发出一些具有抗氧化能力的海洋生物源生物活性肽，但是关于其抗氧化的明确机制并不清晰。总的认为，生物活性肽的抗氧化作用是一种协同作用，主要通过以下3个方面体现。①直接清除自由基，减少细胞组成的氧化损伤。活性肽可以直接清除过氧离子、羟基自由基、ROO·、RO·和H2O2等，减少活性氧对DNA、蛋白质和不饱和脂肪的氧化损伤，维持细胞活性。②调控抗氧化防御蛋白或酶的表达，减少氧化损伤。抗氧化生物活性肽可以提高抗氧化防御蛋白-铁蛋白和细胞保护酶-血红素氧合酶的表达，抗氧化酶-谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的酶活性，减少血清和肝脏中丙二醛（MDA）对线粒体的损伤。③保护细胞膜脂质，减少氧化损伤。抗氧化生物活性肽通常具有疏水特性，使它们能够更接近细胞膜，更便捷地清除细胞膜周围的自由基，避免其被氧化损伤。
4抗氧化肽的构效关系研究
目前，有关活性肽的生物活性与其结构之间关系的报道不多，但可以发现某些肽的活性与其分子量、氨基酸的种类排列顺序以及肽的构象有密切的关系[39]。
4.1分子量
分子量是生物活性肽活性功能体现的最重要的影响因子之一。研究证明，2～10个氨基酸组成的低聚肽的抗氧化活性强于其母体蛋白或由10～50个氨基酸组成多肽。与高分子量的多肽相比，低分子量的生物活性肽可能更有效地通过生物膜，接近作用靶标清除脂质自由基。Jeon等[40]用从金枪鱼中提取的天然蛋白酶来水解鳕鱼骨架，发现相对分子质量为5 kDa水解物的抗氧化活性约是分子量为10 kDa水解物的2倍，且基本与维生素E的抗氧化活性相当。林琳等[41]研究发现，鱿鱼皮胶原蛋白多肽相对分子质量小于2 kDa组分对O2-·和·OH的清除效果显著优于分子量大于10、6～10和2～6 kDa的肽组分。同样，Ranathunga等[25]发现，来源于康吉鳗的分子量小于1 kDa的肽组分对亚油酸抗氧具有最强的抑制能力。然而，Wu等[42]采用自溶法和外加蛋白酶法水解鲭，发现其水解产物具有显著的抗氧化性，且相对分子质量在1.4 kDa左右的肽抗氧化能强于相对分子质量为0.2和0.9 kDa的肽组分。这可能与肽的氨基酸组成有关，也可能与不同大小的多肽在不同的抗氧化测定体系中显示的抗氧化效率不同有关。
4.2肽的氨基酸种类
研究表明，生物活性肽的抗氧化活性与其氨基酸的组成具有很高的相关性。这可能是由这些组成氨基酸的结构特征决定的。例如，Tyr、His、Trp、Phe、Met和Gly以及疏水性氨基酸Val、Ala和eu对活性肽的抗氧化活性非常重要。目前制备纯化获得抗氧化活性肽的N端通常为疏水性氨基酸残基（Val或Leu），一级结构中包含Tyr、His、Trp、Pro、Met和Cys等，少数活性肽中主要包含酸性氨基酸残基、Glu和Asp。Qian等[7]对从牡蛎中分离得到的蛋白质在体外进行消化研究，发现通过连续的色谱分离得到一个分子量为1.6 kDa的多肽其氨基酸，其序列为LKQELEDLLEKQE。该对多不饱和脂肪酸的抗氧化活性要明显高于α生育酚。Suetsuna[3]在对虾多肽的抗氧化测试中发现，胃蛋白酶消化的氨基酸排序鉴定为IKK、FKK和FIKK的对虾多肽的清除自由基能力最强。Kim等[20]将从阿拉斯加狭鳕皮中提取的胶原蛋白经氧化氢酶和蛋白酶水解后，分离出2种具有不同抗氧化活性的肽GPOGPOGPOGPOG和GEOGPOGPOGPOGPOG，它们分别由13、16个氨基酸残基组成，C末端均含有一个Gly残基和重复的GlyProHyp结构。Rajapakse等[2，6]从乌贼中获得的抗氧化肽富含Gly和Leu。Won等[38]发酵紫贻贝提取的抗氧化肽序列为FGHPK，而且其活性还与序列中酸性氨基酸侧链羟基螯合金属离子相关。有很多研究报道，含有His残基的二肽具有较强的抗氧化活性。尽管含His肽的构效关系尚不明确，但普遍认为其供电子能力、脂质过氧化氢自由基清除能力和/或金属离子螯合能力与His的咪唑环相关。此外，His在抗氧化肽序列中的位置对其抗氧化活性具有很大的影响。含有His残留N端的肽比含有His残留C端的肽具有更高的螯合能力和自由基清除能力[19]。
4.3疏水性
不同蛋白来源的肽的疏水性增加，使之具有更高的抗氧化活性。肽的疏水性氨基酸如His、Pro、Cys、Tyr、Trp等是抗氧化的具有非极性的侧链，加强了与疏水多不饱和脂肪酸的相互作用，延迟了脂质结合氧气发生过氧化链式反应或抑制脂质氢的释放。Rajapakse等[6]从巨型乌贼肌肉分离获得2个具有较强活性的抗氧化肽NADFGLNGLEGLA和NGLEGLK。它们能够显著地抑制亚油酸脂质的过氧化作用，其活性甚至高于天然抗氧化剂维生素E。这可能与其序列含有75%的疏水氨基酸（如Gly、Leu和Ala）相关。此外，其脂质过氧化反应的抑制作用亦可能与疏水二氨基酸序列（-Gly-Leu）高频存在相关。Ranathunga等[25]从康吉海鳗分离获得的抗氧化活性9肽LGLNGDDVN也具有较强的脂质过氧化抑制作用，它含有约55%疏水氨基酸残基。Kim 等[18]从长尾鳕鱼中分离获得一个抗氧化肽ESTVPERTHPACCPDFN，相对于维生素E，它能更有效地抑制脂质过氧化；它由约44%的疏水性氨基酸残基组成。由此可见，多肽疏水性的增强使其更易接近疏水性的脂质自由基，从而发挥清除作用。 4.4肽的构象
肽的抗氧化活性还会受到氨基酸、氨基酸间短程相互作用的空间构象的影响。肽的构象（二级结构、疏水性及二硫键等）对肽活性具有直接的影响。Mendis等[5]发现，鱿鱼皮明胶抗氧化肽NGPLQAGQPGER和FDSGPAGVL的抗氧化性是由于富含间隔的“亲水-疏水”序列。同时，也有学者人工合成贝类抗氧化肽的氨基酸序列，通过插入和删除一些序列结构实现其抗氧化活性的改变。此外，氨基酸残疾的构象改变也会对其抗氧化活性具有一定的影响。Chen 等[43]发现，采用DHis取代三肽ProHisHis中LHis，导致其抗氧化活性下降。这可能与咪唑环的位置、方向对其供电子能相关。
5 抗氧化肽的应用前景与研究展望
在促进人类健康的功能食品和保健品中，抗氧化肽因具有延缓衰老、预防心血管疾病等作用而备受青睐，已受到科学工作者和行业的普遍关注，如北海臻美达海洋生物制品有限公司的“酶解海参肽粉”等。在食品业，抗氧化肽可以减缓不饱和脂肪酸的脂质氧化过程，同时可以作为一种安全的抗氧化添加剂应用于食品的保鲜。
我国海洋资源丰富，但在抗氧化海洋生物活性肽的研究开发上，投入的研究力量相对较少，阻碍其生物学功能的开发利用。近年来，许多学者应用各种新型的制备（定向酶解）和分离技术，对生物活性肽开发和功能研究的逐步开展和深入，并且相继走上产业化应用。因此，抗氧化海洋生物活性肽有着十分广阔的市场应用前景。
尽管从各种蛋白资源中分离、纯化和鉴定了一些抗氧化活性肽，但是它们的抗氧化机制还不十分明确。在未来的抗氧化活性肽的研究，以下方面值得关注：
①目前不同的研究中采用的抗氧化活性分析试验方法体系存在差异，使得不同实验室间的结果很难进行直接的比较分析，因此，建立抗氧化活性分析的标准方法体系十分有必要；
②基于不同的抗氧化机制，在抗氧化活性的分析中宜采用不同的试验方法组合进行分析，有助于构建抗氧化活性肽的抗氧化机制网络图谱；
③抗氧化肽的活性体现具有食品体系的依赖性，因此采用更准确的接近目标食物和生物体系的模拟体系来进行活性分析尤为重要；
④抗氧化肽虽然展现了广泛的疾病预防和健康促进效应，但是目前的许多研究仍停留在体外化学分析，因此需要通过设计巧妙的体内试验、动物和人类临床研究进一步评估其健康促进作用和潜在的风险；
⑤加工条件的稳定性对其活性的影响应予以关注，同时需要对抗氧化活性肽在体内的生物利用率、胃肠道内的稳定性和吸收、代谢转换及降解对其抗氧化活性的影响进行深入的研究。
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生物活性肽（Bioactive peptide）具有特殊的生物活性和生理功能，如抗氧化、抗血栓、抗高血压、抗病毒、抗癌、降胆固醇、抑菌、免疫调节等。与氨基酸相比，小肽可以被人体更好地吸收和利用。因此，生物活性小肽不仅是筛选药物的天然资源宝库，而且是功能性食品工业的主要原料成分[1]。
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1氧化损伤与抗氧化剂
人体衰老和一些氧化应激相关疾病如炎症、糖尿病、心血管疾病和癌症等都与体内自由基造成细胞的氧化损伤相关。自由基是独立存在的、外层轨道上带有一个或一个以上未配对电子的原子、原子团或分子，其特点为活性高、不稳定。在机体内，过多的自由基可损伤生物大分子，影响细胞的正常结构和功能。活性氧在生物体内的新陈代谢过程中会产生过氧离子（O2·-）和羟基自由基（·OH），使得酶不可逆地活化，造成对细胞的损伤。自由基可以攻击DNA、蛋白质、脂类等大分子，从而加速机体的衰老，致使糖尿病、心血管疾病和癌症等的发生。
人体可以通过以下5种形式有效地降低体内自由基水平，防止脂质过氧化，帮助机体抵御疾病：①供氢还原；②直接清除或淬灭活性氧自由基，如O2·-、·OH、ROO·、RO·等；③在脂质颗粒外围形成保护膜，阻抑脂质氧化引发剂的渗透和扩散；④螯合过渡金属离子，减少氧化酶的配体，降低酶活性；⑤激活机体本身内在的抗氧化防御蛋白和酶的表达，如铁蛋白、血红素氧合酶（HO1）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）等，减少ROS和丙二醛（MDA）的生成。目前，应用较多的是一些人工合成类抗氧化剂，如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）、特丁基对苯二酚（TBHQ）、没食子酸丙酯（PG）等。由于它们本身有一定的毒副作用，这些抗氧化合成物用量需严格控制。开发天然抗氧化剂逐渐成为一种必然趋势。
抗氧化活性肽是一种具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基功效的生物活性肽。由于肽类的两亲性，它们不仅在油溶体系中有良好的增效作用，而且在水溶体系、乳化体系及干基体系中有较高的抗氧化活性，所以其应用广泛。生物体内天然存在的抗氧化肽类主要为肌肽和谷胱甘肽，但这些肽类在天然原料中存在的含量较低，分离、纯化困难。研究证明，蛋白酶水解产生的肽具有一些蛋白质无法比拟的两性性质和结构灵活性。所以，近年来利用蛋白酶来水解海洋生物蛋白，例如从鱼类、蓝贻贝、乌贼、虾类、康吉鳗、海绵、海鞘、芋螺、海葵、海星、海藻、海兔等蛋白获得许多抗氧化肽。
2海洋生物源抗氧化活性肽的生产
目前，生物活性肽的制备技术主要包括微生物发酵和蛋白酶水解。微生物发酵生产生物活性肽主要是通过微生物内源性蛋白酶的作用。发酵除产生一些生物活性肽之外，还赋予产品独特的风味和质构。通过发酵紫贻贝获得具有较高抗氧化活性的小肽FGHPY[1]。
蛋白酶水解不仅可使一些过敏源蛋白降低或消除致敏性，而且是目前制备活性肽的主要技术（表1）。根据生物活性肽的构效关系，选择蛋白酶种类，可制备特定结构的生物活性肽。目前，在蛋白酶水解体系中采用的蛋白酶主要有工业食品级蛋白酶，如碱性蛋白酶[21-22，30-33]；微生物来源的复合蛋白酶，如protamex[10]、Orientase[13]、Protease XXIII[23]、subtilisin[28-34]等；植物来源的蛋白酶，如木瓜蛋白酶[12，15，29，32，35]；动物来源的蛋白酶，如胃蛋白酶[2-3，6-10，27，36]、胰凝乳蛋白酶[6，8]和胰蛋白酶[4-6，18，25-26]等。其中，使用较多的为胃蛋白酶和胰蛋白酶。主用考虑因素为这些酶获得生物活性肽能够耐受体内消化酶的降解，提高其在体内的生物利用度，并且能够通过体外试验结果预测体内的功能特性。现有海洋生物源抗氧化活性肽的制备蛋白来源广泛，主要来自于海洋动物，如日本对虾[2]、鱼类[4-5，8-10，12-15，17-24，26-27，29-33，35]、牡蛎[6，28，34]、蛤[25]和紫贻贝[37]等以及海洋藻类[3，11，16]和微生物[7，36]。已产生、获得的抗氧化活性肽种类繁多，从二肽到十六肽，其抗氧化作用主要通过供氢还原[2]、清除活性氧自由基[4-9，11-18，21-37]、提高氧化防御蛋白和酶的表达、减少活性氧的形成[21-22，31]、抑制脂质氧化[10，14，19-20]等抗氧化途径完成。 此外，还有定向合成法（主要包括化学合成、酶法合成、DNA重组技术等）以及从微生物、动植物体内直接提取分离纯化法[38]等。合成法受设备投资大、产品成本高等条件的限制，当前其技术成熟度仅限于小分子寡肽的合成；因天然生物资源中功能肽的含量极低，直接提取法成本较高，目前虽有一些商品化的天然功能性肽，但难以大规模推广。因此，蛋白酶水解法仍是目前生物活性肽生产的最主要方法。
3生物活性肽的抗氧化机制
目前，已经开发出一些具有抗氧化能力的海洋生物源生物活性肽，但是关于其抗氧化的明确机制并不清晰。总的认为，生物活性肽的抗氧化作用是一种协同作用，主要通过以下3个方面体现。①直接清除自由基，减少细胞组成的氧化损伤。活性肽可以直接清除过氧离子、羟基自由基、ROO·、RO·和H2O2等，减少活性氧对DNA、蛋白质和不饱和脂肪的氧化损伤，维持细胞活性。②调控抗氧化防御蛋白或酶的表达，减少氧化损伤。抗氧化生物活性肽可以提高抗氧化防御蛋白-铁蛋白和细胞保护酶-血红素氧合酶的表达，抗氧化酶-谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的酶活性，减少血清和肝脏中丙二醛（MDA）对线粒体的损伤。③保护细胞膜脂质，减少氧化损伤。抗氧化生物活性肽通常具有疏水特性，使它们能够更接近细胞膜，更便捷地清除细胞膜周围的自由基，避免其被氧化损伤。
4抗氧化肽的构效关系研究
目前，有关活性肽的生物活性与其结构之间关系的报道不多，但可以发现某些肽的活性与其分子量、氨基酸的种类排列顺序以及肽的构象有密切的关系[39]。
4.1分子量
分子量是生物活性肽活性功能体现的最重要的影响因子之一。研究证明，2～10个氨基酸组成的低聚肽的抗氧化活性强于其母体蛋白或由10～50个氨基酸组成多肽。与高分子量的多肽相比，低分子量的生物活性肽可能更有效地通过生物膜，接近作用靶标清除脂质自由基。Jeon等[40]用从金枪鱼中提取的天然蛋白酶来水解鳕鱼骨架，发现相对分子质量为5 kDa水解物的抗氧化活性约是分子量为10 kDa水解物的2倍，且基本与维生素E的抗氧化活性相当。林琳等[41]研究发现，鱿鱼皮胶原蛋白多肽相对分子质量小于2 kDa组分对O2-·和·OH的清除效果显著优于分子量大于10、6～10和2～6 kDa的肽组分。同样，Ranathunga等[25]发现，来源于康吉鳗的分子量小于1 kDa的肽组分对亚油酸抗氧具有最强的抑制能力。然而，Wu等[42]采用自溶法和外加蛋白酶法水解鲭，发现其水解产物具有显著的抗氧化性，且相对分子质量在1.4 kDa左右的肽抗氧化能强于相对分子质量为0.2和0.9 kDa的肽组分。这可能与肽的氨基酸组成有关，也可能与不同大小的多肽在不同的抗氧化测定体系中显示的抗氧化效率不同有关。
4.2肽的氨基酸种类
研究表明，生物活性肽的抗氧化活性与其氨基酸的组成具有很高的相关性。这可能是由这些组成氨基酸的结构特征决定的。例如，Tyr、His、Trp、Phe、Met和Gly以及疏水性氨基酸Val、Ala和eu对活性肽的抗氧化活性非常重要。目前制备纯化获得抗氧化活性肽的N端通常为疏水性氨基酸残基（Val或Leu），一级结构中包含Tyr、His、Trp、Pro、Met和Cys等，少数活性肽中主要包含酸性氨基酸残基、Glu和Asp。Qian等[7]对从牡蛎中分离得到的蛋白质在体外进行消化研究，发现通过连续的色谱分离得到一个分子量为1.6 kDa的多肽其氨基酸，其序列为LKQELEDLLEKQE。该对多不饱和脂肪酸的抗氧化活性要明显高于α生育酚。Suetsuna[3]在对虾多肽的抗氧化测试中发现，胃蛋白酶消化的氨基酸排序鉴定为IKK、FKK和FIKK的对虾多肽的清除自由基能力最强。Kim等[20]将从阿拉斯加狭鳕皮中提取的胶原蛋白经氧化氢酶和蛋白酶水解后，分离出2种具有不同抗氧化活性的肽GPOGPOGPOGPOG和GEOGPOGPOGPOGPOG，它们分别由13、16个氨基酸残基组成，C末端均含有一个Gly残基和重复的GlyProHyp结构。Rajapakse等[2，6]从乌贼中获得的抗氧化肽富含Gly和Leu。Won等[38]发酵紫贻贝提取的抗氧化肽序列为FGHPK，而且其活性还与序列中酸性氨基酸侧链羟基螯合金属离子相关。有很多研究报道，含有His残基的二肽具有较强的抗氧化活性。尽管含His肽的构效关系尚不明确，但普遍认为其供电子能力、脂质过氧化氢自由基清除能力和/或金属离子螯合能力与His的咪唑环相关。此外，His在抗氧化肽序列中的位置对其抗氧化活性具有很大的影响。含有His残留N端的肽比含有His残留C端的肽具有更高的螯合能力和自由基清除能力[19]。
4.3疏水性
不同蛋白来源的肽的疏水性增加，使之具有更高的抗氧化活性。肽的疏水性氨基酸如His、Pro、Cys、Tyr、Trp等是抗氧化的具有非极性的侧链，加强了与疏水多不饱和脂肪酸的相互作用，延迟了脂质结合氧气发生过氧化链式反应或抑制脂质氢的释放。Rajapakse等[6]从巨型乌贼肌肉分离获得2个具有较强活性的抗氧化肽NADFGLNGLEGLA和NGLEGLK。它们能够显著地抑制亚油酸脂质的过氧化作用，其活性甚至高于天然抗氧化剂维生素E。这可能与其序列含有75%的疏水氨基酸（如Gly、Leu和Ala）相关。此外，其脂质过氧化反应的抑制作用亦可能与疏水二氨基酸序列（-Gly-Leu）高频存在相关。Ranathunga等[25]从康吉海鳗分离获得的抗氧化活性9肽LGLNGDDVN也具有较强的脂质过氧化抑制作用，它含有约55%疏水氨基酸残基。Kim 等[18]从长尾鳕鱼中分离获得一个抗氧化肽ESTVPERTHPACCPDFN，相对于维生素E，它能更有效地抑制脂质过氧化；它由约44%的疏水性氨基酸残基组成。由此可见，多肽疏水性的增强使其更易接近疏水性的脂质自由基，从而发挥清除作用。 4.4肽的构象
肽的抗氧化活性还会受到氨基酸、氨基酸间短程相互作用的空间构象的影响。肽的构象（二级结构、疏水性及二硫键等）对肽活性具有直接的影响。Mendis等[5]发现，鱿鱼皮明胶抗氧化肽NGPLQAGQPGER和FDSGPAGVL的抗氧化性是由于富含间隔的“亲水-疏水”序列。同时，也有学者人工合成贝类抗氧化肽的氨基酸序列，通过插入和删除一些序列结构实现其抗氧化活性的改变。此外，氨基酸残疾的构象改变也会对其抗氧化活性具有一定的影响。Chen 等[43]发现，采用DHis取代三肽ProHisHis中LHis，导致其抗氧化活性下降。这可能与咪唑环的位置、方向对其供电子能相关。
5 抗氧化肽的应用前景与研究展望
在促进人类健康的功能食品和保健品中，抗氧化肽因具有延缓衰老、预防心血管疾病等作用而备受青睐，已受到科学工作者和行业的普遍关注，如北海臻美达海洋生物制品有限公司的“酶解海参肽粉”等。在食品业，抗氧化肽可以减缓不饱和脂肪酸的脂质氧化过程，同时可以作为一种安全的抗氧化添加剂应用于食品的保鲜。
我国海洋资源丰富，但在抗氧化海洋生物活性肽的研究开发上，投入的研究力量相对较少，阻碍其生物学功能的开发利用。近年来，许多学者应用各种新型的制备（定向酶解）和分离技术，对生物活性肽开发和功能研究的逐步开展和深入，并且相继走上产业化应用。因此，抗氧化海洋生物活性肽有着十分广阔的市场应用前景。
尽管从各种蛋白资源中分离、纯化和鉴定了一些抗氧化活性肽，但是它们的抗氧化机制还不十分明确。在未来的抗氧化活性肽的研究，以下方面值得关注：
①目前不同的研究中采用的抗氧化活性分析试验方法体系存在差异，使得不同实验室间的结果很难进行直接的比较分析，因此，建立抗氧化活性分析的标准方法体系十分有必要；
②基于不同的抗氧化机制，在抗氧化活性的分析中宜采用不同的试验方法组合进行分析，有助于构建抗氧化活性肽的抗氧化机制网络图谱；
③抗氧化肽的活性体现具有食品体系的依赖性，因此采用更准确的接近目标食物和生物体系的模拟体系来进行活性分析尤为重要；
④抗氧化肽虽然展现了广泛的疾病预防和健康促进效应，但是目前的许多研究仍停留在体外化学分析，因此需要通过设计巧妙的体内试验、动物和人类临床研究进一步评估其健康促进作用和潜在的风险；
⑤加工条件的稳定性对其活性的影响应予以关注，同时需要对抗氧化活性肽在体内的生物利用率、胃肠道内的稳定性和吸收、代谢转换及降解对其抗氧化活性的影响进行深入的研究。
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