【摘 要】
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目的 建立以多重定量连接酶链反应（multiplex quantitative ligase chain reaction,MQ-LCR）为基础的聋病基因诊断技术,实现廉价、快捷、准确的检测目标.方法 针对GJB2基因230delC、299-300delAT,mtDNA A1555G,SLC26A4基因IVS7-2 A＞G、2168A＞G等5种突变类型设计相应的探针和引物,建立检测体系,从复旦大学
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院眼耳鼻咽喉科上海市儿童听力障碍诊治中心,上海201102,复旦大学附属儿科医院眼耳鼻咽喉科上海市儿童听力障碍诊治中心,上海201102
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目的 建立以多重定量连接酶链反应（multiplex quantitative ligase chain reaction,MQ-LCR）为基础的聋病基因诊断技术,实现廉价、快捷、准确的检测目标.方法 针对GJB2基因230delC、299-300delAT,mtDNA A1555G,SLC26A4基因IVS7-2 A＞G、2168A＞G等5种突变类型设计相应的探针和引物,建立检测体系,从复旦大学儿科医院眼耳鼻喉咽科门诊中随机选择感音神经性聋儿98例以及听力正常对照30名,遵循双盲法原则分别以MQ-LCR法和DNA测序法进行检测,结果进行比较分析.结果 98例聋儿中发现聋病基因纯合或双突变48例,杂合突变31例,阴性19例,GJB2基因突变致病的占29.6%（29/98）,mtDNAA1555G致聋的占4.08%（4/98）,SLC26A4致聋的占15.31%（15/98）.30名听力正常对照中发现杂合突变3例,阴性27例,其中GJB2基因235delC杂合突变2例,IVS7-2A＞G1例.经分析MQ-LCR和DNA测序法检测结果完全一致,未发现假阳性和假阴性.结论 所建立的MQ-LCR法检测聋病常见突变（235delC、299-300delAT、mtDNA A1555G、IVS7-2 A＞G、2168A＞G）具有价格便宜,操作快捷,结果准确可靠的特点,可应用于我国常见聋病基因的大规模筛查,为明确聋儿病因,降低聋生出生率提供一种很好的方法。
其他文献
患儿男，10岁，因“双侧隐睾”就诊。患儿系足月、顺产、5岁时发现头颅大，经医院诊断为脑积水。几岁时做双侧隐睾手术。患儿身高120cm。头颅发育不规则，颜面不对称，自小严重的智力低下，说话不清。双侧睾丸5ml，小阴茎，腹股沟疝，肌张力低下。母亲自诉妊娠时无患病及服药史，无有毒有害物质及放射线接触史，父母生育患儿的年龄都在27岁，父母表型正常，非近亲结婚，无家族遗传病史。
先证者(Ⅲ1)女,21岁,汉族.患者自述幼年开始双手及双足掌面皮肤发黄粗糙,来本院请求产前遗传咨询.患者五官端正、面部和周身皮肤均正常。
患者 女,29岁,已婚.原发性闭经,依赖药物月经来潮,未避孕未育3年.查体:身高161 cm,体重45 kg,外观及智力正常.乳房发育不良.妇科检查:外阴幼稚型,阴毛、腋毛较正常女性少,子宫偏小,阴道、附件未检出异常.其父因消化道肿瘤病故,其母亲、哥哥及两个侄女表型均无异常.患者夫妇非近亲结婚,患者丈夫表型正常,体检未见异常。
患儿 女,2岁6个月,第1胎,足月剖腹产,出生时体重3kg,无窒息史.现仍不能独立行走,仅能发单音.母亲自述患儿从小体弱易生病.查体:患儿生长发育尚可,左手拇指多指畸形(六指),其面貌、外生殖器官均无明显异常。
先证者 男,33岁.14岁时不明原因出现四肢乏力,伴全身肌肉酸痛.症状进行性加重,两年后发展为双上肢抬举费力,上楼、蹲起均感困难,并出现四肢近端肌肉轻度萎缩。
例1 男,30岁,婚后4年不育,严重少精子症,精于密度:4.12×106/mL,a级8.96%,b级20.9%,c级7.46%,性激素水平正常,睾丸发育良好,AZF基因检测:bSY127缺失,拟行卵胞浆内单精子注射技术(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕,术前检查,外周血染色体核型:46,XY,t(1;20;5)(p22;p13;q13)(lqter→
先证者(Ⅲ6) 男,3岁2个月.患儿2岁3个月时无明显诱因出现双眼睑下垂,晨轻暮重,常易跌倒,走路时易疲乏,饮水呛咳,吞咽困难,说话声音含糊,近半年来易感冒,上述症状加重,且出现瞬目少,常流泪,双侧眼睑下垂交替加重.于2010年1月就诊.入院查体:颈软,双侧甲状腺不大,双侧眼球各方向运动不良,瞳孔对光反射灵敏,双眼睑闭合欠佳,双眼睑下垂,咽反射差,四肢肌力Ⅳ级,肌张力可
先证者(Ⅳ10) 男,40岁,因"进行性四肢肌萎无力23年"就诊.患者23年前无明显原因出现右手握物无力,精细动作差,后渐累及左手,并出现双手大小鱼际肌,骨间肌肌肉萎缩,无肌肉跳动及肌肉疼痛。
患者女,30岁,月经周期4/30天,量中等,无痛经.婚后两年未孕.因丈夫患有"少弱精症"而接受辅助生殖技术治疗.经hMG促排卵后获卵6枚,采用单精子卵胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术获得4个胚胎,选取其中2个移植入子宫腔。
目的 通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)12S rRNA、tRNA~(Ser(UCN))以及核基因GJB2突变分析,研究mtDNA突变与遗传性耳聋的相关性.方法 临床听力测试以明确诊断,收集非综合征型遗传性耳聋家系中18例母系成员和53名对照(包括6名父系亲属、7名配偶对照和40名当地无关对照)外周静脉血样本,采用聚合酶链反应和测