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肝纤维化是由于肝脏损伤导致的慢性疾病，肝纤维化末期可能导致肝硬化和肝癌。据统计，西方国家肝硬化的患病率大约是1.1％，肝纤维化的发病率远高于1.1％。肝纤维化是一个可逆的损伤修复过程，正常肝脏损伤与肝脏修复是处于稳态过程。当肝脏受到各种刺激因素的损伤，此动态平衡将会被打破，肝脏实质细胞逐渐被胶原蛋白替代，持续损伤修复使得肝脏正常结构被破坏，导致纤维化的形成，经过近十年的发展有可能形成肝硬化，甚至肝癌。肝纤维化的诱因比较复杂，其中酒精、病毒感染、药物、毒物、胆汁淤积、寄生虫病和代谢性疾病等能够导致的肝脏的慢性损伤的因素都与肝纤维化具有密切的关系。 肝纤维化的诊断在肝纤维化治疗过程中占据很重要的部分，早期的诊断有益于肝纤维化的治疗甚至可以导致肝纤维化的逆转。针对肝纤维化的诊断主要包括一下几种:肝脏活体穿刺检测、血清学指标检测、Fibroscan检测、超声检测等一系列技术以及技术的相关联用。肝脏活体穿刺检测是肝纤维化检测的金标准，但存在死亡风险、重复性低等一系列缺点。Fibroscan检测技术实现了肝纤维化的无创检测，但是仍然存在检测特异性低、准确性低等问题。现有的血清学指标包括直接指标以及间接指标，相关指标经常联合使用，组成各种评分系统，通常有APRI、FibroTest、Forns指数等。但现有的血清学指标在肝纤维化检测中也具有特异性低、准确性低等问题。不过由于血清学检测的快捷、方便、价格便宜等优点，针对肝纤维化的血清学指标研究一直是研究热点。理想的诊断标志物要求能及时反应肝纤维化的程度和实时监测肝纤维化的动态发展，并且具有良好的敏感性和特异性。 在本课题中通过前期的实验证明ECM1在肝纤维化过程处于较低的表达水平，同时ECM1基因敲除的小鼠会自发的产生肝纤维化，预示着ECM1可能作为一个肝纤维化诊断的很好的生物学标志物。为了高效、快速研究ECM1表达量与肝纤维化关系，通过实验室成熟的CHO表达系统，表达高活性蛋白。并且利用此蛋白制备了高亲和活性的一株兔抗鼠多抗及四株鼠抗人单抗。通过竞争ELISA进行抗体配对筛选到检测灵敏度最高的配对抗体。用小鼠ECM1单克隆抗体作为包被抗体，Biotin标记的兔血清作为检测抗体，制备小鼠ECM1检测试剂盒。其灵敏度是0.01ng/mL，线性范围0.1ng/mL-10ng/mL，批内和批间变异率均＜15％，血清样本回收率为99.8％。为了进一步验证试剂盒检测的准确性，利用四氯化碳(CCL4)诱导小鼠肝纤维化模型，连续采血和监测ECM1在疾病中的动态变化。实验证明，小鼠血浆中ECM1含量的变化与其肝纤维化程度成负相关。在人试剂盒中采用实验室3号抗体作为包被抗体，Biotin标记的4号作为检测抗体，制备人ECM1检测试剂盒。灵敏度是0.01ng/mL，线性范围0.1ng/mL-10ng/mL，批内和批间变异率均＜15％。通过小样本临床血浆样本检测初步确定ECM1的含量与肝纤维化程度呈负相关。通过临床血浆中标准品添加回收实验，对比了自制试剂盒和商用ECM1诊断试剂盒，结果显示本实验室自制的试剂盒比购买试剂盒具有更好的精确度。 总之，本课题成功制备ECM1高亲和抗体，并且抗体配对组装ECM1检测试剂盒，并且证明ECM1在肝纤维化病人血浆中下降，ECM1可以作为肝纤维化诊断生物学标记物。