【摘 要】
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目前认为RI有以下功能:1.一些细胞质核糖核酸酶(RNases)可以通过分泌腺分泌、内吞或者靶向错误而进入细胞,与RNA作用,降解RNA,影响转录与翻译.RI则可以起到一个卫兵的作用来
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目前认为RI有以下功能:1.一些细胞质核糖核酸酶(RNases)可以通过分泌腺分泌、内吞或者靶向错误而进入细胞,与RNA作用,降解RNA,影响转录与翻译.RI则可以起到一个卫兵的作用来保护细胞免受外来RNases的损伤.试验证明,非胞质RNases对RI非常敏感,是RI的天然底物,它们对不含有RI的哺乳动物细胞具有很高的毒性;2.核糖核酸酶超家族成员之一血管生成因子(Angiogenin,Ang)是肿瘤细胞和正常细胞分泌的分子量为14.4kD的蛋白质,在体内外具有强烈的诱发血管生成的活性.RI也是Ang的高效抑制剂,能与其紧密结合抑制其促进血管生成的活性.是一种很有潜力的抗肿瘤血管药;3.RI具有较强的抗氧化损伤能力.可以通过富含的还原型巯基来抵抗氧化物质对细胞的损伤,防止脂质过氧化.4.RI可以调节某些不起RNA抑制作用的RNase家族成员的生物功能.该实验主要是采用突变的方法研究RI的结构与抗氧化功能的关系,为理论研究提供直接的实验依据,并且期望得到更稳定和更具生物学活性的hRI突变体.具体突变方法是通过缺失突变除去hRI N端10个氨基酸残基及采用基因特异性点突变的方法用Ala取代Cys328、Cys329.该实验主要做了以下工作:1将逆转录病毒载体pLNCX与hR1 cDNA形成的重组子(pLNCX-RI)、pLNCX与用Ala替代Cys328和Cys329的hRI cDNA突变体形成的重组子(pLNCX-mutation),以及pLNCX与N端切去10个氨基酸残基的hRI cDNA突变体形成的重组子(pLNCX-N10)分别用脂质体法转染C6细胞,用G418筛选出含有稳定重且子的C6细胞,经PCR进行鉴定,用Western Blot证明转RI的C6细胞RI过表达.2以不同浓度H<,2>O<,2>损伤未转染C6细胞和以转染的上述3种C6细胞,拍照并经MTT法检测细胞存活率,比较上述4种细胞的抗氧化能力.3将上述4种细胞各分为二组(实验组和对照组),对照组加PBS缓冲液,实验组加1mmol/LH<,2>O<,2>损伤,比较上述4种细胞损伤后过氧化氢酶(CAT)乳酸脱氢酶(LDH)黄嘌呤氧化酶(XOD)超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,分析上述4种细胞抗氧化能力的强弱.
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