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为了观察我国较早开始接受抗病毒治疗的艾滋病病人的抗病毒治疗效果、耐药发生和发展的规律,我们在河南和安徽两省建立了前瞻性研究队列,目前两个队列已随访了6年。本研究通过敏感性很高的单基因组测序的方法,对队列中部分病人体内的HIV-1耐药准种的耐药突变形式、变化规律和耐药突变位点之间的相互联系进行了探讨。
病毒持续无抑制的四份样本结果显示,HIV-1准种出现多位点的耐药突变时,病毒载量处于相对稳定的状态,表明病毒载量的变化和病人体内HIV-1准种出现耐药突变有关的。研究发现8例(80％)患者针对NRTIs的耐药突变在初次检出耐药时均为单一位点突变。针对NNRTIs耐药突变首次检出时6例患者以多位点突变形式,4例患者以单一位点K103N突变形式存在,而且均能产生高度耐药。研究还发现,K103N和K101E突变不在同一HIV-1准种中出现。带有耐药位点的HIV-1准种比例随着治疗时间的延长不断增加。M41L/A98G/K101E/V106I/G190A/T215Y、K103N/Y181C/H221Y、M41L/K103N/V118I/Y181C/L210W/T215Y、M41L/K101E/G190A/T215Y、M41L/K101E/Y181C/G190A/L210W/T215Y、M41L/K103N/Y181C/L210W/T215Y为最稳定的突变形式,均能稳定保持24个月以上,提示携带这些突变的病毒准种的适应性较好。单基因组测序的方法能够比常规基因型耐药基因检测提前检测到的耐药突变位点有K103N,G190A,T215Y,M41L,Y181C,K219R,E44A,E44A/D,L210W,A98G,V106I,K101E,提前时间为5-30个月不等。单基因组测序使劣势病毒准种的检出成为可能,并且为药物选择压力下,系统研究病人体内病毒准种的进化规律提供了方法。
自从第一种整合酶抑制剂raltegravir被美国FDA批准用于治疗多重耐药的艾滋病病人已经两年多了,虽然中国还没有使用这种抗病毒药物,但是了解现在中国主要流行的HIV-1整合酶基因的本底特征是很有必要的。我们分别从中国B’(123例)、CRF07_BC(68)、CRF01_AE(28)三种我国主要流行的HIV-1血浆样本中提取HIVRNA,然后经巢式PCR扩增出整合酶基因,并测序。219条整合酶基因区序列分别与斯坦福耐药数据库的共享序列比较,研究了整合酶基因的多态性。本研究还比较了这三种亚型整合酶抑制剂的遗传障碍差异。研究发现整合酶基因区的催化核心结构域、羧基端结构域和氨基端结构域多态性比例≥0.5％的氨基酸位点分别占35.2％、27.3％和42.9％。一些辅助性的耐药位点T97A(0.46％),A128T(O.46％),E138K(3.2％),Y143C(0.46％),E157Q(2.7％),G163R(0.9％),R263K(0.46％)属于多态性位点。中国主要流行的B,CRF_07BC,CRF01_AE三个主要流行亚型22个整合酶抑制剂相关的耐药位点遗传障碍分析结果显示大部分的位点(18/22)在这三种亚型中是非常保守的而且具有相似的遗传障碍。只有140位点的遗传障碍在三种亚型中有差异,其中G140C和G140S突变形式在CRF01_AE亚型中具有较高的遗传障碍,在CRF07_BC亚型中次之,B亚型中最低。