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杆状病毒是一类寄生节肢动物的病毒，杆状病毒的病毒粒子为杆状，基因组由大小为80kb-180kb左右的双链环状超螺旋DNA构成，外有囊膜包被。杆状病毒表达系统(Baculovirus expression vector system，BEVS)是应用广泛的外源基因表达系统，是与大肠杆菌、酵母、哺乳动物相并列的四大表达系统之一，苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus，AcMNPV)是该类系统最主要的表达载体。AcMNPV感染昆虫细胞的生活史中会产生两种不同形态的病毒粒子:出芽型病毒粒子(Budded virus，BV)与包涵体（多角体）衍生病毒粒子（Occlusion-derived virus，ODV）。当AcMNPV在昆虫细胞中连续传代以后，会出现从多多角体表型（Many polyhedra，MP）到少多角体表型(Few polyhedra, FP)的转变，这种转变与一个编码25kDa蛋白的基因(Few polyhedra，fp25k)突变后导致蛋白失活有关。AcMNPV的fp25k基因突变后产生的ODV变少而BV增加，会影响到杆状病毒表达系统(BEVS)对外源基因的表达。因此通过改造fp25k基因，替换病毒载体中原来易突变fp25k基因，使杆状病毒载体传代稳定;或将改造fp25k基因在细胞中稳定表达，对应用杆状病毒表达系统的产业具有重要意义。 本文主要研究内容和结果如下: 1.fp25k基因改造。 为克服fp25k基因突变对杆状病毒表达系统的不利影响，本实验对AcMNPV的fp25k基因在昆虫细胞中传代时容易产生突变的3处位点进行改造，分别是:A7-1 MNR、A7-1 MNR以及一个容易有宿主DNA转座插入的TTAA位点，得到表达相同氨基酸序列但不容易发生突变的Mfp25k目的片段。 2.构建重组载体稳定转化昆虫细胞系。 我们得到Mfp25k并将其构建到pIZT/V5-His载体上，得到pIZT-Mfp25k，稳定转化粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4与草地贪夜蛾细胞Sf9，通过Zeocin抗性筛选得到了基因组中带有Mfp25k的2种转基因昆虫细胞系TN-Mfp25k与Sf9-Mfp25k。 3.转基因昆虫细胞系弥补fp25k突变型病毒FP表型。 用fp25k突变型AcMNPV病毒株系AcP2感染转基因细胞，以正常TN/Sf9细胞做对照，发现转基因细胞TN-Mfp25k与Sf9-Mfp25k中的多角体产量与对照组有明显区别，FP表型得到补救，转基因细胞表达的FP25K蛋白可弥补AcMNPVfp25k基因突变的缺陷。结果为构建稳定的杆状病毒-昆虫细胞表达系统提供了新途径。