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研究背景: 肾细胞癌(Renal cell carcinoma，RCC)约占成人恶性肿瘤的2％～3％，在泌尿系统恶性肿瘤中致死率排第二位[1]，并且在发达地区的发病率远高于落后地区。RCC中最常见的类型是肾透明细胞癌(Clear Cell Renal Cell Carcinoma，ccRCC)，约占所有RCC的80％[2]。ccRCC起源于临近肾小管内层，在治疗过程中对放疗和化疗不敏感[2]。因目前还没有对ccRCC发生前期或者是发生早期的生物学标记物等评估手段，所以在确诊的ccRCC病人中30％以上的病人发生了肿瘤转移[1]。在转移性ccRCC病人中细胞因子治疗后的患者生存率低于一年。因此通过研究ccRCC发病及发展机理，找到有效的基因学标记物也成了当今最为重要的研究项目。近年来，虽然在ccRCC的基因学研究得到了不少的进展，但目前并未充分阐明肿瘤发生发展基因学原理与生物学标记物。 微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一种内源性具有调控功能的非编码小RNA，其可与靶基因的mRNA结合并在转录后水平调节基因的表达，参与调节组织细胞的生物学行为[3]。因此miRNA在肿瘤细胞中基因的表达及肿瘤的发生发展起着十分重要的作用。实验室的miRNA芯片前期研究结果表明，miRNA-106b-5p（miR-106b-5p）在ccRCC中表达量发生改变，从而假设miR-106b-5p是否通过对靶基因的调节影响着ccRCC肿瘤的发生和发展，对miR-106b-5p在ccRCC细胞中的功能进行了详细的功能性研究。 方法: 1、总RNA提取和realtime-PCR实验:使用PARISTM Kit提取总RNA后再利用miR-106b-5p和U6特异性逆转录为cDNA模板。然后进行realtime-PCR实验。 2、提取组织和细胞蛋白，再进行western-blot实验。 3、细胞功能实验:运用MTS实验检测细胞增殖能力的改变、Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力的改变。 4、利用psi-check2质粒，构建包含ZBTB4和E2F13UTR的荧光素酶报告基因质粒。 5、荧光素酶酶实验:将构建好的报告基因质粒与miR-106b-5p(mimics，mimics-NC，inhibitor, inhibitor-NC)转入Caki-2细胞，按照荧光素酶酶实验说明进行实验。 结果: 1.miR-106b-5p在ccRCC肿瘤组织的表达明显高于其在正常组织中的表达;miR-106b-5p在转移性ccRCC肿瘤组织中的表达低于其在非转移性ccRCC肿瘤组织中的表达。 2.与在HK2，HKC细胞中的表达量相比，miR-106b-5p在Caki-2，786-O，A498等ccRCC肿瘤细胞株中的表达量中明显增高。与在转移性细胞株ACHN，Caki-1， SN12-PM6相比，miR-106b-5p表达量在Caki-2，786-O，A498细胞中的表达量还是有所增加。 3.细胞功能实验结果表示，过表达miR-106b-5p可增强ccRCC细胞株增殖，但并未增强转移性ccRCC细胞株的侵袭性。 4.通过荧光素酶实验，miR-106b-5p可以靶向ZBTB4和E2F1，抑制其在ccRCC细胞中的表达。 结论: miR-106b-5p可促进ccRCC发生，而并未促进ccRCC转移。miR-106b-5p在ccRCC不同发展阶段与不同恶性程度发挥着不同的作用。