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[研究目的]乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率均位居女性肿瘤的榜首,而乳腺癌的转移是造成患者死亡及预后较差的主要原因。研究发现,染色体不稳定（chromosomal instability,CIN）在癌症的发展中起到重要的驱动作用,与肿瘤转移的增加密切相关,但其具体分子机制仍不明确。SIRT7作为第三类组蛋白去乙酰化酶家族成员,参与调控染色质结构及维持基因组稳定性等,在以往的研究中我们发现了SIRT7与乳腺癌的转移存在相关性,但其调控乳腺癌转移的具体机制仍待进一步明确。因此,本研究旨在从CIN的角度探讨SIRT7促进乳腺癌细胞转移中的作用及其机制。[研究方法]1、乳腺癌细胞经低剂量多柔比星预处理7天后构建的CIN细胞中,使用Western blot、RT-PCR技术进行细胞SIRT7表达水平的检测;使用划痕实验、Transwell等细胞学实验,分析细胞的体外迁移能力和侵袭能力。2、构建SIRT7敲低的乳腺癌细胞模型,利用Western blot、RT-PCR及激光共聚焦成像技术检测敲低SIRT7与阴性对照组乳腺癌细胞中染色体稳定性的相关指标的表达。3、筛选找到SIRT7调控细胞CIN的下游分子Lap2α,通过CO-IP、Western blot、RT-PCR及泛素化水平检测等实验验证SIRT7与Lap2α的互作关系。4、对收集的乳腺癌病理组织进行免疫组织化学检测,检验SIRT7和Lap2α蛋白的表达在乳腺癌组织中存在相关性。5、应用Kaplan Meier plotter网站分析公共数据库中Lap2αmRNA表达量与乳腺癌患者存活情况的相关性。6、分别构建敲低Lap2α细胞株及回补Lap2α的SIRT7敲低细胞株。利用Western blot、RT-PCR检测染色体稳定性的相关指标。并通过划痕实验、Transwell实验等细胞学实验,分析Lap2α在SIRT7介导的乳腺癌细胞转移中的作用。[实验结果]1、CIN会提高SK-BR-3及MCF-7细胞的迁移能力和侵袭能力。2、CIN与SIRT7存在相关性,在CIN细胞中,SIRT7表达量明显降低。在乳腺癌细胞SK-BR-3和MCF-7中敲除SIRT7会导致细胞CIN水平提高。3、SIRT7与Lap2α蛋白在细胞内直接结合,敲低SIRT7会导致Lap2α在蛋白水平表达下调,而敲低Lap2α对SIRT7的表达量无影响,表明SIRT7是Lap2α的上游分子。4、在乳腺癌病理组织中SIRT7和Lap2α的蛋白表达量呈正相关。5、乳腺癌细胞中敲低SIRT7可通过影响Lap2α蛋白的泛素化水平,增加蛋白降解,导致Lap2α的表达下调。6、在敲低SIRT7的细胞中回补Lap2α后,部分染色体稳定性相关指标有部分回升,表明SIRT7可通过下调Lap2α导致细胞CIN。单独敲低SIRT7或Lap2α均会导致乳腺癌细胞转移能力增强,在敲低SIRT7的细胞中回补Lap2α后,可减弱细胞的转移能力。Lap2αmRNA的低表达是乳腺癌患者预后的不良因素。表明敲低SIRT7可通过下调Lap2α的表达提高乳腺癌细胞的转移能力。[结论]1、敲低SIRT7会导致乳腺癌细胞的CIN增加。2、SIRT7与Lap2α在细胞内互作,敲低SIRT7可提高Lap2α蛋白的泛素化降解水平,引起Lap2α在蛋白水平的表达下调。3、下调SIRT7通过调控Lap2α增加细胞CIN及乳腺癌细胞的转移能力,提示SIRT7/Lap2α通路可作为染色体不稳定乳腺癌细胞的潜在治疗靶点。