钙敏感受体在动脉硬化大鼠心肌梗死中的作用及机制

• 作 者: 郭津
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 钙敏感受体 动脉硬化 心肌梗死 细胞凋亡

目的：观察钙敏感受体(CaSR)在动脉硬化大鼠心肌梗死中的表达变化规律；探讨CaSR在动脉硬化大鼠心肌梗死中的作用及相关机制。　　
方法：(1)采用腹腔注射VD3和高脂饮食及皮下注射异丙肾上腺素(ISO)方法，复制大鼠在体动脉硬化心肌梗死模型，记录心功能，测定血清LDH、SOD、CK活性和MDA含量以及cTnT水平，HE染色和透射电镜观察心肌结构变化；应用RT-PCR、Western blot技术分别测定心肌组织中CaSR mRNA和蛋白的表达变化。(2)采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育心肌细胞，用模拟缺血培养液培养3小时后，更换为正常DMEM培养液常规培养6小时的方法建立新生大鼠心肌细胞缺血-再灌注模型。利用MTT比色法、TUNEL染色和流式细胞仪检测心肌细胞存活率和凋亡率：采用透射电镜观察细胞损伤变化；激光扫描共聚焦显微镜测定心肌细胞内钙离子([Ca2+])的变化；Western blot等方法观察心肌细胞caspase-3和Bax/Bcl-2的蛋白的表达；采用Western blot方法分析细胞色素c（Cyt-c）的释放，CaSR蛋白的表达。(3)以GdC13（CaSR的激动剂）和NPS2390(CaSR的抑制剂)作为干预因素，Western blot检测凋亡通路的蛋白表达，观察CaSR在细胞凋亡中的作用。　　
结果：(1)高脂饮食6周后，大鼠血清TG、TC水平明显升高，腹主动脉血管壁增厚且出现明显指纹结构等，同时心肌CaSR表达增加；该动脉硬化大鼠再连续大剂量注射ISO后，血清中CK、LDH活性和cTnT水平明显升高，心肌超微结构损伤严重，CaSR表达进一步增加，促凋亡蛋白表达增加，抑凋亡蛋白表达减少。(2)ox-LDL作用心肌细胞后，CaSR的蛋白表达明显增加，呈ox-LDL剂量和时间依赖性。(3)GdC13能够促进ox-LDL所诱发的CaSR蛋白表达增多、线粒体通路凋亡蛋白表达增加，[Ca2+]i增高，缺氧/复氧心肌细胞凋亡加重；NPS2390的作用相反。　　
结论：(1)高脂饮食联合皮下注射ISO可成功复制大鼠动脉硬化心肌梗死模型，同时伴CaSR表达增加，后者通过激活p38 MAPK和线粒体途径，增加心肌梗死发生的易感性。(2)ox-LDL诱导新生大鼠心肌细胞可使CaSR表达增加。(3)CaSR激活能够促进ox-LDL和缺氧/复氧引起的[Ca2+]i增高，激活心肌细胞线粒体凋亡通路。