【摘 要】
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目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳鼠心肌细胞中的表达水平,以及SHP-2在去血清培养诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的调节作用。
方法:采用免疫荧光和免疫印迹检测去血清培养组和
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目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳鼠心肌细胞中的表达水平,以及SHP-2在去血清培养诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的调节作用。
方法:采用免疫荧光和免疫印迹检测去血清培养组和正常对照组SHP-2的表达和定位。用胎盘蓝染色方法检测心肌细胞去血清后的死亡状况。TUNEL染色,PI/Hoechest33258双染检测心肌细胞的凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3的表达和Cyt-C的释放。
结果:在乳鼠心肌细胞中有SHP-2的表达,而且去血清培养不能抑制SHP-2的表达,正常对照组SHP-2在胞浆和胞核中都有表达,而去血清培养后SHP-2转位到胞浆中。胎盘蓝染色结果显示,去血清培养组的细胞死亡率均高于正常对照组,随着去血清时间的延长,细胞死亡率逐渐增加,呈时间依赖性。PI/Hoechest33258双染结果显示,正常对照组的凋亡率为4.03±2.34,SHP-2抑制剂-NSC-87877对照组凋亡率为10.6±6.13,去血清培养24h组的凋亡率为13.13±3.21,去血清培养24h+NSC-87877组的凋亡率为24.46±4.01,去血清培养36h组的凋亡率为19.3±1.95,去血清培养36h+NSC-87877组的凋亡率为31±5.48,去血清培养48h组的凋亡率为23.7±0.72,去血清培养48h+NSC-87877组的凋亡率为29.13±4.16。TUNEL试剂盒检测结果显示,正常对照组的凋亡率为5.32±0.54,抑制剂NSC-87877对照组凋亡率为9.86±3.97,去血清培养组的凋亡率为22.84±2.33去血清加抑制剂培养组的凋亡率为28.97±5.84。以上结果显示去血清培养组和去血清培养同时加SHP-2抑制剂组都有凋亡存在,但去血清加SHP-2抑制剂组要比去血清培养组凋亡严重,而且去血清加SHP-2抑制剂组的凋亡相关蛋白Cyt-C的释放和Caspase3的表达比单存去血清培养组要多。
结论:在去血清的诱导下,乳鼠心肌细胞发生凋亡,但是去血清培养后没有抑制SHP-2在心肌细胞中的表达。SHP-2磷酸酶活性在细胞凋亡通路中发挥重要的调节作用,其调节机制可能和抑制Cyt-C的释放和Caspase3的激活有关。
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