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研究背景宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤。根据世界卫生组织（World Health Organization,WHO）全球癌症数据统计报告,2018年全球宫颈癌的发病比例（13.1%）和死亡比例（6.9%）在女性全身肿瘤中排第四位。高危型人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）的持续感染是发生宫颈癌的主要危险因素。根据宫颈癌的自然发展史,低级别上皮内病变（low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL）中有60%消退,30%持续,10%进展为高级别上皮内病变（highgrade squamous intraepithelial lesion,HSIL）,1%发展为宫颈浸润癌。从 HPV 感染至发展为宫颈癌一般需10余年时间。虽然育龄期妇女感染HPV非常普遍,但是其中85%-90%为一过性感染,只有少数HPV感染呈持续感染状态。此外,HPV感染并不是宫颈癌发生的唯一因素。在宫颈腺鳞癌中,HPV阴性率达14%,宫颈腺癌中的HPV阴性率更是高至30%。这使我们做更深层次的思考,除了 HPV持续感染外,还有其它因素参与了宫颈癌的发生发展。早期宫颈癌最常采用手术治疗,转移性或复发性宫颈癌的常规治疗方法包括放疗和化疗,但这种治疗方法在晚期疾病中效果有限。健康的免疫系统需要免疫检查点（immunecheckpointblockers,ICB）以维持免疫平衡。肿瘤免疫微环境中免疫细胞的功能失调是肿瘤进展的原因之一。近年来,关于ICB通路的免疫调节药物的使用已成为治疗恶性肿瘤的有效策略。程序性死亡受体-1（programmedcell death 1,PD-1）抑制剂派姆单抗（pembrolizumab）在宫颈癌临床试验中的总体反应率为14%,另一种针对PD-1的单克隆抗体纳武单抗（nivolumab）在宫颈癌临床试验的客观缓解率为26.3%。从目前现有的数据来看,单纯抑制PD-L1/PD-1通路的免疫治疗的效果有限。因此,以免疫检查点抑制剂为基础,针对转移性/复发性宫颈癌患者的免疫联合治疗的相关研究正在开展。其中针对PD-L1与转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）的双靶点抗体 Bintrafusp alfa用于转移性/复发性宫颈癌患者的临床试验研究结果显示,Bintrafusp alfa能将患者的总缓解率提高到30.8%。另外,PD-1抑制剂联合细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白 4（cytotoxicTlymphocyte-associatedantigen-4,CTLA-4）的双靶点抗体在晚期/复发性宫颈癌的有效率也提升至31.6%-45.8%。可见双免疫检查点的联合阻断可以让更多患者获得临床缓解,显著改善患者预后。CD 155是免疫球蛋白超家族的成员。CD 155首先作为脊髓灰质炎病毒受体被发现,命名为PVR（poliovirus receptor）。CD155可以通过免疫受体酪氨酸抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif,ITIM）启动信号转导,进而调控细胞黏附、运动、增殖和存活。CD155在健康组织中表达比较低,但在多种恶性肿瘤中表达升高。CD155除了在恶性肿瘤中表达升高并且发挥促癌作用外,还可以与具有免疫球蛋白和免疫受体络氨酸抑制基序区结构域的T细胞免疫受体（T cell immunoreceptor with immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT）相结合。TIGIT是一种抑制性受体,主要表达于NK细胞（natural killer cell,NK）、CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和调节性T细胞（regulatory cells,Tregs）。CD155做为TIGIT的高亲和力配体,能够与NK、T淋巴细胞上的TIGIT结合,通过激活ITIM发挥免疫抑制,抑制NK、T淋巴细胞的功能。近年来,针对TIGIT靶向治疗的研究越来越多。阻断TIGIT的单克隆抗体在黑色素瘤,乳腺癌以及纤维肉瘤的临床前模型中表现出良好的治疗潜力。同时,阻断性抗体TIGIT联合PD-L1/PD-1通路抑制剂的抗肿瘤作用也在小鼠结肠癌模型和胶质瘤模型中得到验证。本课题发现CD155在宫颈癌患者中表达升高,并且探讨了 CD155促进宫颈癌发生发展的相关分子机制,以及CD155/TIGIT信号通路对宫颈癌CD8+T淋巴细胞的免疫抑制作用。具体研究内容包括以下三个部分:第一部分CD155在宫颈癌中的表达、临床意义及生物学功能研究研究目的:1.检测CD155在宫颈癌患者血浆及石蜡组织标本中的表达情况和临床意义。2.研究CD155对宫颈癌细胞生物学功能的影响。研究方法:1.通过TCGA和GEO数据库分析CD155在宫颈癌和正常宫颈组织中的差异性表达。收集具有预后信息的数据进行生存分析,CD155表达升高与患者不良预后相关。2.通过酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）和免疫组化技术（immunohistochemistry,IHC）检测CD155在正常宫颈者、HSIL患者和宫颈癌患者血浆和石蜡组织标本中的表达水平,并且根据分泌型CD155（soluble or secreted CD155,sCD155）在血浆的表达水平分析sCD155对宫颈癌患者和HSIL+（HSIL+宫颈癌）患者的诊断效能。3.转染慢病毒和小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）调控宫颈癌细胞系CaSki和HeLa中CD155的表达水平。通过CCK-8增殖实验、细胞周期实验及裸鼠宫颈癌皮下移植成瘤实验检测调控CD155后,细胞增殖的变化;通过细胞凋亡实验检测调控CD155后,细胞凋亡的变化;通过Transwell实验检测调控CD155后,细胞迁移和侵袭能力的变化;通过Western Blot方法检测调控CD155后,细胞增殖和细胞凋亡相关分子的表达变化。研究结果:1.CD155在宫颈癌患者血浆和石蜡组织标本中高表达通过TCGA及GEO数据库下载包含宫颈癌组织和正常宫颈组织的表达数据,使用“limma包”进行差异基因的表达分析,对数据进行标准化处理,运用ggplot2和ggsigni绘制箱式图。结果显示,在数据库GSE29570,GSE52903,GSE67522和TCGA-GTEx,CD155在宫颈癌组织中的表达水平高于正常宫颈组织;生存分析结果显示,在数据库GSE44001、GSE52903和TCGA-GTEx中,CD155高表达的患者有较短的无进展生存期或总生存期。我们收集了 30例宫颈癌患者、20例HSIL患者和17例正常宫颈者的血浆。ELISA结果显示,sCD155在宫颈癌患者和HSIL患者中的表达水平明显高于正常宫颈者。此外,我们还应用Logistic回顾性分析sCD155检测对宫颈癌患者和HSIL+患者的诊断效能。通过分析宫颈癌患者和正常宫颈者两组间sCD155的表达水平,sCD155对宫颈癌患者的诊断效能较高,受试者工作曲线下面积（area under curve,AUC）为0.727,敏感性为0.63,特异性为0.76;通过分析HSIL+患者和正常宫颈者两组间sCD155的表达水平,结果显示,sCD155对HSIL+患者也有较高的诊断效能,AUC为0.769,敏感性为0.6,特异性为0.88。我们收集在山东大学齐鲁医院接受手术切除的宫颈癌患者组织66例,HSIL患者组织16例和正常宫颈者组织18例。免疫组化分析结果显示:CD155在正常宫颈者、HSIL患者和宫颈癌患者的表达水平逐渐升高。2.CD155促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移和抗凋亡能力在宫颈癌细胞系CaSki和HeLa中下调CD155后,细胞的增殖能力、侵袭及迁移能力下降,凋亡能力增加;在CaSki和HeLa细胞系中过表达CD155后,细胞的增殖能力、侵袭及迁移能力增加,凋亡能力下降;我们在裸鼠成瘤实验中证明,过表达CD155后与对照组相比,肿瘤的体积和重量显著增加。为了进一步验证CD155对宫颈癌细胞增殖和凋亡能力的影响,我们用Western Blot实验检测影响细胞周期和细胞凋亡相关分子的蛋白表达情况,在CaSki和HeLa细胞系中下调CD155后,细胞增殖相关分子CDK2,CyclinD1,P27KIP1,C-myc,E2F1和Ki67的蛋白表达量下降,而细胞凋亡相关分子CL-Caspase3,CL-Caspase9和CL-PARP的蛋白表达量升高;当在CaSki和HeLa细胞系中上调CD155后,上述影响细胞周期和细胞凋亡相关分子的蛋白表达水平则呈现出相反的趋势。研究结论:1.CD155在HSIL患者和宫颈癌患者中的表达水平明显高于正常宫颈者。2.CD155影响宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭功能从而发挥促癌作用。第二部分CD155促进宫颈癌发生发展的分子机制研究研究目的:第一部分我们已经明确了 CD155在宫颈癌中表达升高并且促进宫颈癌的恶性行为,本部分我们试图研究CD155发挥促癌作用的上、下游机制。研究方法:1.通过信号通路的广筛抗体芯片结果分析,CD155抑制宫颈癌细胞自噬,激活AKT/mTOR 和 NF-κB 通路。2.通过抑制AKT进行反向验证,在过表达CD155和其对照的宫颈癌细胞中下调AKT后,Western Blot检测AKT/mTOR和NF-κB相关通路分子的变化,流式细胞术检测细胞凋亡比例变化。3.宫颈癌细胞中敲低CD155后,应用自噬抑制剂巴佛洛霉素A1（BafA1）或氯喹（CQ）抑制细胞自噬,探究敲低CD155诱导的自噬对宫颈癌细胞凋亡的影响。4.通过数据库预测分析CD155启动子区域存在转录因子YY1的结合位点。通过RT-PCR和Western Blot验证CD155与YY1的调控关系。通过染色质免疫共沉淀、双荧光素酶报告基因检测实验证明YY1与CD155的启动子区域直接结合。研究结果:1.信号通路的广筛抗体芯片结果分析信号通路的广筛抗体芯片是由上海华盈生物技术有限公司开发的肿瘤信号通路磷酸化广谱筛选抗体芯片。CaSki细胞中敲低CD155组与对照组相比,敲低CD155组细胞中有161个蛋白分子上调,127个蛋白分子下调。对16条与肿瘤发生发展相关的信号通路进行筛选和比较。通路分析结果显示差异蛋白分子主要集中在自噬相关分子、AKT/mTOR和NF-κB通路上。2.CD155抑制宫颈癌细胞自噬,激活AKT/mTOR和NF-κB通路我们用Western Blot实验检测干扰或过表达CD155后,自噬相关分子、AKT/mTOR和NF-κB信号通路的蛋白表达改变。结果显示:在CaSki和HeLa细胞中下调 CD155 后,p-AKT,p-mTOR,p-P70S6K,p-4EBP1,p-IKKγ,p-IKKα/β和p-NF-κBp65的蛋白水平显著降低,Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3I的蛋白水平显著升高。而上调CD155后,结果与之相反。我们通过细胞免疫荧光实验检测CD155对细胞自噬水平的影响。在CaSki和HeLa细胞下调CD155后,LC3B荧光斑块数量增加,促进自噬水平;上调CD155后,结果与之相反。细胞免疫荧光检测CD155对细胞质p-IκBα和细胞核p-NF-κBp65表达水平的影响。在CaSki和HeLa细胞下调CD155后,细胞质p-IκBα和细胞核p-NF-κBp65表达的水平下降,上调CD155后,结果与之相反。以上结果表明CD155抑制宫颈癌细胞自噬,激活AKT/mTOR 和 NF-κB 通路。3.敲低CD155诱导的细胞自噬为保护性自噬为了确定敲低CD155介导的自噬是保护性自噬还是死亡性自噬。我们在CaSki和HeLa细胞中敲低CD155后应用自噬抑制剂Baf A1或CQ,48h后评估CaSki和HeLa细胞中凋亡相关分子和细胞凋亡比例的变化。Western Blot实验表明,Baf A1或CQ导致敲低CD155组细胞的自噬相关蛋白LC3Ⅱ及细胞凋亡相关分子CL-Caspase3、CL-Caspase9和CL-PARP的表达升高。此外,细胞凋亡实验也显示Baf A1或CQ导致敲低CD155组的细胞凋亡数目增多。这说明,敲低CD155诱导的细胞自噬为保护性自噬,抑制自噬增加细胞凋亡。4.AKT敲低逆转CD155过表达诱导的抗凋亡、AKT/mTOR和NF-κ B通路的激活前述结果表明,过表达CD 155抑制宫颈癌细胞自噬和凋亡,激活AKT/mTOR和NF-κB通路。AKT为mTOR和NF-κB通路的共同上游,因此我们通过敲低AKT的表达来进行反向验证。我们在过表达CD155组及其对照组的CaSki和HeLa中敲低AKT,细胞凋亡实验结果显示,敲低AKT后,过表达CD155组宫颈癌细胞的凋亡比例增加;Western blot实验结果显示,敲低AKT后,过表达CD155组的宫颈癌细胞中凋亡相关分子Caspase9、Caspase3的剪接增多。这表示AKT敲低逆转了 CD 155过表达诱导的抗凋亡作用。此外,Western Blot实验结果还显示:敲低AKT后,过表达CD155组的宫颈癌细胞中自噬相关分子Beclin-1、LC3Ⅱ/LC31升高,而p-mTOR、p-IKKγ,p-IKKα/β的表达水平降低,这表明敲低AKT逆转了 CD155诱导的自噬抑制、AKT/mTOR和NF-κB通路。5.YY1在宫颈癌中高表达并调控宫颈癌细胞中CD155的表达通过NCBI网站查询CD155的启动子序列,然后用JASPAR软件和Cistrome网站预测CD155的启动子区域结合的转录因子和结合位点。通过分析GEO、TCGA以及GTEx数据库中宫颈癌组织和正常宫颈组织YY1 mRNA的表达,结果表明,宫颈癌组织中YY1 mRNA的表达显著高于正常组织。Spearman检验相关性分析显示,CD155与YY1在mRNA水平上呈正相关表达。我们从mRNA水平和蛋白水平研究YY1对CD155是否存在调控关系。RT-PCR和Western Blot实验结果显示:在CaSki和HeLa细胞中敲低YY1后,CD155表达显著降低,在CaSki和HeLa细胞中过表达YY1后,CD155表达显著升高。这表明YY1可以在mRNA和蛋白水平上调控CD155的表达。6.YY1转录激活CD155的启动子从而调控其表达为了验证YY1是否可以直接调控CD155的表达,我们根据之前预测的结合位点设计质粒和引物进行后续实验。首先,利用双荧光素酶报告基因检测实验验证,过表达YY1使野生型CD155启动子的荧光素酶活性明显增高,我们进一步对site1和site2结合位点进行突变,结果显示荧光素酶活性显著降低。此外,我们设计合成了覆盖site1和site2的引物,通过染色质免疫共沉淀验证了 YY1与CD155直接结合。7.YY1敲低可以挽救CD155过表达在宫颈癌中的生物学行为我们已经验证了 YY1对CD155的调控作用。我们利用“Rescue”实验进一步研究YY1对CD155调控的生物学功能的影响。我们在过表达CD155组及其对照组的宫颈癌细胞中敲低YY1。CCK-8实验结果显示:在过表达CD155组的宫颈癌细胞中敲低YY1后,细胞的增殖比例减少;Transwell实验显示:在过表达CD155组的宫颈癌细胞中敲低YY1后,细胞的迁移、侵袭细胞数目减少;凋亡实验结果表明:在过表达CD155组的宫颈癌细胞中敲低YY1后,细胞的凋亡比例增多,这说明敲低YY1可以逆转CD155过表达在宫颈癌中的促进作用。研究结论:1.CD155通过抑制自噬,激活AKT/mTOR和NF-κB通路促进宫颈癌细胞的恶性行为。2.YY1为CD155的直接上游基因,通过转录激活CD155,调控宫颈癌细胞增殖、侵袭及转移和凋亡能力。第三部分CD155/TIGIT结合调控CD8+T淋巴细胞的功能及相关机制研究研究目的:1.检测TIGIT及TIGIT+CD8+T淋巴细胞在宫颈癌患者外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）及石蜡组织标本中的表达情况。2.明确CD155/TIGIT免疫检查点对宫颈癌CD8+T淋巴细胞的免疫抑制作用。研究方法:1.流式细胞术及免疫组化检测TIGIT及TIGITCD8+T淋巴细胞在宫颈癌患者PBMC及石蜡组织标本中的表达情况。2.从健康人PBMC中分出CD8+T淋巴细胞,在体外经过anti-CD3/CD28抗体和IL-2刺激激活,设置分组:CD8+T淋巴细胞+空白对照（IgG）共培养组、CD8+T淋巴细胞+重组蛋白CD155（CD155-Fc）共培养组、CD8+T淋巴细胞+阻断性抗体TIGIT（Anti-TIGIT）共培养组、CD8+T淋巴细胞+阻断性抗体PD-1（Anti-PD-1）共培养组、CD8+T淋巴细胞+Anti-TIGIT+Anti-PD-1共培养组。共培养24h后,流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞的功能因子TNF-α、IFN-γ和GranzymeB的分泌,并通过Western Blot检测共培养后CD8+T淋巴细胞中ERK和NF-κB通路相关分子的变化。3.通过 CRISPR/Cas9 技术构建 U14-KO-CD155 和 U14-NC-CD155 细胞系,使用C57BL/6小鼠构建U14-KO-CD155和U14-NC-CD155宫颈癌移植瘤模型,研究CD155在体内实验中对CD8+T淋巴细胞的免疫抑制作用;通过野生型U14细胞建立C57BL/6小鼠宫颈癌移植瘤小鼠模型,腹腔内注射Anti-TIGIT和（或）Anti-PD-1研究阻断TIGIT以及联合阻断TIGIT和PD-1对CD8+T淋巴细胞的免疫抑制解除作用。研究结果:1.TIGIT在宫颈癌患者PBMC及组织中高表达我们从山东大学齐鲁医院收集16例宫颈癌患者、15例HSIL患者和16例正常宫颈者的外周静脉血,提取PBMC。RT-PCR结果显示:宫颈癌患者PBMC中TIGIT的表达水平明显高于HSIL患者和正常宫颈者。此外,我们还在宫颈癌患者PBMC mRNA水平上对TIGIT和PD-1、TIGIT和淋巴细胞活化基因-3（Lymphocyte activation gene-3,LAG3）、TIGIT 和 T 细胞免疫球蛋白-3（T cell immunoglobulin-3,Tim3）进行 Spearman 相关性检验,结果显示:TIGIT 和 PD-1、TIGIT和LAG3、TIGIT和Tim3之间的表达呈正相关。我们收集11例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织,进行免疫组化分析,结果显示宫颈癌组织中TIGIT的表达水平明显高于癌旁组织。2.TIGIT+CD8+T淋巴细胞在宫颈癌患者PBMC及组织中高表达我们从山东大学齐鲁医院收集了 20例宫颈癌患者、20例HSIL患者和20例正常宫颈者的外周静脉血,提取PBMC,通过流式细胞术进行CD8+T淋巴细胞表面分子检测。结果显示:宫颈癌患者PBMC中的TIGIT+CD8+T淋巴细胞的比例明显高于HSIL患者和正常宫颈者。此外,我们还收集5对宫颈癌和癌旁组织进行多重免疫荧光组织化学检测,结果显示:TIGIT定位于CD8+T淋巴细胞上,并且宫颈癌组织中TIGIT+CD8+T淋巴细胞的浸润水平明显高于癌旁组织。我们通过流式细胞术对外周血TIGIT+CD8+T淋巴细胞和TIGITCD8+T淋巴细胞进行淋巴细胞功能分析,结果显示:TIGIT-CD8+T淋巴细胞分泌细胞因子TNF-α和IFN-γ的能力明显高于TIGIT+CD8+T淋巴细胞。3.CD155/TIGIT抑制CD8+T淋巴细胞的功能我们从健康人外周血中分离出CD8+T淋巴细胞,经过anti-CD3/CD28和IL-2活化刺激后和CD155-Fc进行共培养,设置三组:CD8+T淋巴细胞+IgG、CD8+T淋巴细胞+5μg/mL CD 155-Fc、CD8+T 淋巴细胞+1 0μg/mL CD155-Fc。另外取活化刺激后的CD8+T淋巴细胞与阻断性抗体建立共培养体系,设置四组:CD8+T淋巴细胞+IgG、CD8+T淋巴细胞+Anti-TIGIT、CD8+T淋巴细胞+Anti-PD-1、CD8+T 淋巴细胞+Anti-TIGIT+Anti-PD-1。共培养 24h 后,流式细胞术检测结果显示:CD155-Fc抑制CD8+T淋巴细胞功能因子TNF-α、IFN-γ和GranzymeB的产生;阻断TIGIT显著增加CD8+T淋巴细胞功能因子TNF-α、IFN-γ和GranzymeB的产生,联合阻断TIGIT和PD-1较单独阻断TIGIT进一步增加CD8+T淋巴细胞功能因子TNF-α、IFN-γ和GranzymeB的产生。4.CD155/TIGIT通过ERK和NF-K B通路抑制CD8+T淋巴细胞的功能我们进一步研究CD155/TIGIT结合对CD8+T淋巴细胞免疫抑制作用的机制。我们分析了 CD8+T淋巴细胞和CD155-Fc、阻断性抗体TIGIT共培养后CD8+T淋巴细胞中相关蛋白的表达水平。结果显示,与CD155-Fc共培养显著抑制了CD8+T淋巴细胞中p-ERK、p-IκBα和p-NF-κBp65的蛋白表达水平。CD8+T淋巴细胞和阻断性抗体共培养结果显示,阻断TIGIT显著增加CD8+T淋巴细胞中p-ERK、p-IκBα和p-NF-κBp65的蛋白表达水平,联合阻断TIGIT和PD-1组较单独阻断TIGIT组进一步增加CD8+T淋巴细胞中p-ERK、p-IκBα和p-NF-κBp65的蛋白表达水平。此外,我们在本部分实验中验证CD8+T淋巴细胞上的TIGIT可以与SHIP-1结合。免疫共沉淀结果显示:TIGIT可以招募SHIP-1并与之相互作用形成TIGIT/SHIP-1复合物。结合免疫共沉淀和Western Blot结果显示,与CD155-Fc共培养后的CD8+T淋巴细胞中TIGIT/SHIP-1复合物的丰度显著增加。5.阻断CD155/TIGIT抑制C57BL/6小鼠宫颈癌移植肿瘤的生长,促进CD8+T淋巴细胞的功能通过测量C57BL/6小鼠宫颈癌皮下移植肿瘤的体积表明:与U14-NC-CD155组相比,U14-KO-CD155组肿瘤的生长速度明显减慢;U14-KO-CD155组肿瘤组织中CD8+T淋巴细胞的浸润水平及CD8+T淋巴细胞分泌功能因子TNF-α和IFN-γ的能力显著增加;在野生型C57BL/6小鼠宫颈癌皮下移植瘤中,阻断TIGIT抑制C57BL/6小鼠宫颈癌移植肿瘤的生长和增殖,联合阻断TIGIT和PD-1增加阻断性抗体TIGIT的抑瘤功能,联合阻断TIGIT和PD-1组肿瘤组织中CD8+T淋巴细胞的浸润水平及CD8+T淋巴细胞分泌功能因子TNF-α和IFN-γ的水平＞单独注射阻断性抗体TIGIT组＞IgG组。研究结论:1.TIGIT+CD8+T淋巴细胞在宫颈癌患者PBMC及组织中高表达,并且发挥免疫抑制下调CD8+T淋巴细胞的功能;2.体内、外实验验证CD155抑制CD8+T淋巴细胞的功能,阻断TIGIT增加CD8+T淋巴细胞的功能,联合阻断TIGIT和PD-1较单独阻断TIGIT进一步增加CD8+T淋巴细胞的功能;3.CD155/TIGIT通过ERK和NF-κB通路诱导CD8+T淋巴细胞的免疫抑制。本研究的创新性1.通过体内、外实验证实了 CD155在宫颈癌发生发展中的作用,并在临床样本中验证CD155可作为宫颈癌肿瘤分子标记物的可行性。2.首次研究了 CD155通过抑制宫颈癌细胞自噬,激活AKT/mTOR和NF-κB通路促进宫颈癌细胞的恶性行为,为宫颈癌的发病机制提供新的思路。3.首次提出并验证了 YY1直接调控CD155的表达。YY1通过结合CD155的启动子区域激活CD155的转录,从而促进CD155的促癌作用。4.初步探讨了 CD155/TIGIT在宫颈癌患者中的负性免疫调节机制,体内、外实验验证CD155/TIGIT诱导CD8+T淋巴细胞的免疫抑制,从而促进宫颈癌的发生发展。CD155/TIGIT有望成为宫颈癌免疫治疗的新靶点。本研究的不足之处1.本课题纳入研究的宫颈癌临床样本数量有限,且大都是HPV阳性的宫颈鳞癌,我们还需更大样本的验证,尤其是对HPV阴性的宫颈癌临床样本的验证。2.人源化免疫小鼠具备人类的部分免疫功能,能更好的模拟人类体内免疫状态,我们在此研究中缺乏关于CD155/TIGIT通路在人源化免疫小鼠模型发挥负性调节作用的验证。3.CD155/TIGIT在宫颈癌患者中可能存在多种负性免疫调节机制,我们在本研究中只研究了 CD155/TIGIT诱导CD8+T淋巴细胞发挥免疫抑制,缺乏对其他免疫细胞的研究。