【摘 要】
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蛋白质间相互作用是当前的研究热点之一。了解蛋白质相互作用的方式、程度、结果,将有助于分析蛋白质的功能、解决生命发育研究中等众多问题。作为系统生物学的重要工具--酵
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蛋白质间相互作用是当前的研究热点之一。了解蛋白质相互作用的方式、程度、结果,将有助于分析蛋白质的功能、解决生命发育研究中等众多问题。作为系统生物学的重要工具--酵母双杂交技术被广泛应用于筛选和鉴定相互作用蛋白,以及通过构建蛋白质相互作用网络,来阐明生命的运行规律。
植物中存在大量的J蛋白,J蛋白可作为同伴蛋白与HSP70组成分子伴侣机器参与对逆境胁迫的应答。ALP1是一种J蛋白,ALP1功能缺失突变体对盐、ABA、JA敏感。而对于ALP1的研究将有助于我们了解植物的抗逆机制。为了揭示ALP1相关的细胞信号转导途径,需要就ALP1的互作机理进行探讨。
本论文在前期研究工作基础上,首先通过生物信息学的预测,获得了拟南芥J蛋白ALP1可能的互作基因,然后采用了MATCHMAKERGAL4 Two-Hybrid System3双杂交系统,对候选基因进行了初步筛选,结果表明ALP1不与这些候选基因互作。同时,构建了酵母诱饵表达载体pGBKT7-ALP1以及拟南芥cDNA文库。其文库的转化效率为1.2×107transformants/3μgpGADT7-Rec,文库的滴度为2.46×109pfu/mL,多态性及重组比符合酵母双杂交文库的构建要求。为后续利用酵母双杂交技术筛选出ALP1的互作蛋白及构建互作图谱奠定了基础。
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