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第一部分KAI1/CD82表达水平和神经母细胞瘤转移之间的关系
目的探讨神经母细胞瘤中KAI1/CD82表达水平与神经母细胞瘤转移能力之间的关系.
方法选取40例不同分期的神经母细胞瘤石蜡标本,采用RT-PCR检测KAI1mRNA的表达;应用免疫组化检测KAI1基因的蛋白产物CD82的表达水平,分析其与神经母细胞瘤转移之间的关系.
结果RT-PCR检测显示有淋巴结或远处转移的神经母细胞瘤KAI1mRNA的相对含量为0.0748±0.0063,而无转移者为0.4576±0.0226,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化显示:无转移的神经母细胞瘤CD82的阳性表达率为71.43%;而有淋巴结或远处转移者阳性表达率为31.58%,差异有统计学意义(P＜0.05),有骨髓浸润者与无骨髓浸润者KAI1/CD82的表达无统计学意义(P＞0.05).
结论KAI1/CD82表达水平与神经母细胞瘤的转移能力呈负相关性,KAI1/CD82表达水平可作为评估神经母细胞瘤的转移潜能、判断预后的一个指标.
第二部分人神经母细胞瘤原位瘤细胞系生物学特性的验证
目的通过选取神经母细胞瘤患者新鲜肿瘤标本建立的人神经母细胞瘤体外细胞系,对神经母细胞瘤细胞系进行验证,为下一步的实验做好细胞的准备工作.
方法原代培养法建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,将细胞放入DMEM培养液,补加10%胎牛血清及青、链霉素,置于37℃、5%CO2、100%湿度的二氧化碳培养箱内培养.Typlan法进行细胞计数;MTT法绘制细胞曲线图;流式细胞仪检测神经母细胞瘤细胞细胞周期;最后,Annexin-V-Flous流式细胞仪定量检测神经母细胞瘤细胞凋亡情况.
结果通过原代培养法建立起人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,细胞染色较深,形状不规则,细胞呈小梭形,部分呈泪滴状,少数呈三角形,菊团状生长,分化低,细胞核大、深染,电镜下可见含有纵行排列的微小管的外围齿状突起,有致密核心的有包膜儿茶酚胺小圆颗粒.Typlan法、MTT法、流式细胞仪及Annexin-V-Flous流式细胞仪定量检测验证细胞系符合神经母细胞瘤细胞生物学特性.
结论我们成功建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,并证实我们自己建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系符合神经母细胞瘤细胞生物学特性,为进一步探讨神经母细胞瘤转移机制奠定基础,并为下一步实验创造了良好的开端.
目的探讨神经母细胞瘤中KAI1/CD82表达水平与神经母细胞瘤转移能力之间的关系.
方法选取40例不同分期的神经母细胞瘤石蜡标本,采用RT-PCR检测KAI1mRNA的表达;应用免疫组化检测KAI1基因的蛋白产物CD82的表达水平,分析其与神经母细胞瘤转移之间的关系.
结果RT-PCR检测显示有淋巴结或远处转移的神经母细胞瘤KAI1mRNA的相对含量为0.0748±0.0063,而无转移者为0.4576±0.0226,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化显示:无转移的神经母细胞瘤CD82的阳性表达率为71.43%;而有淋巴结或远处转移者阳性表达率为31.58%,差异有统计学意义(P＜0.05),有骨髓浸润者与无骨髓浸润者KAI1/CD82的表达无统计学意义(P＞0.05).
结论KAI1/CD82表达水平与神经母细胞瘤的转移能力呈负相关性,KAI1/CD82表达水平可作为评估神经母细胞瘤的转移潜能、判断预后的一个指标.
第二部分人神经母细胞瘤原位瘤细胞系生物学特性的验证
目的通过选取神经母细胞瘤患者新鲜肿瘤标本建立的人神经母细胞瘤体外细胞系,对神经母细胞瘤细胞系进行验证,为下一步的实验做好细胞的准备工作.
方法原代培养法建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,将细胞放入DMEM培养液,补加10%胎牛血清及青、链霉素,置于37℃、5%CO2、100%湿度的二氧化碳培养箱内培养.Typlan法进行细胞计数;MTT法绘制细胞曲线图;流式细胞仪检测神经母细胞瘤细胞细胞周期;最后,Annexin-V-Flous流式细胞仪定量检测神经母细胞瘤细胞凋亡情况.
结果通过原代培养法建立起人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,细胞染色较深,形状不规则,细胞呈小梭形,部分呈泪滴状,少数呈三角形,菊团状生长,分化低,细胞核大、深染,电镜下可见含有纵行排列的微小管的外围齿状突起,有致密核心的有包膜儿茶酚胺小圆颗粒.Typlan法、MTT法、流式细胞仪及Annexin-V-Flous流式细胞仪定量检测验证细胞系符合神经母细胞瘤细胞生物学特性.
结论我们成功建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系,并证实我们自己建立人神经母细胞瘤原位瘤细胞系符合神经母细胞瘤细胞生物学特性,为进一步探讨神经母细胞瘤转移机制奠定基础,并为下一步实验创造了良好的开端.