WT1基因在骨髓增生异常综合征患者中的表达研究

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目的1.利用FQ-RT-PCR检测RA、RAEB、RAEBt的WT1表达水平的变化;2.通过回顾性分析,观察RA患者发病初期的WT1表达情况;3.在个体化水平观察MDS患者从RA演变到RAEB、RAEBt甚至白血病时,WT1表达水平的变化。探讨WT1基因在MDS诊断和预后判断中的意义。方法1.回顾性分析山西医科大学第二医院从2000年至2003年的病例。按FAB标准选取MDS患者45例。其中男24例、女21例、中位年龄43岁,包括RA患者18例、RAEB 16例、RAEBt 11例;18例RA中,有13例回顾诊断的RA,未经过治疗;储存三年以上的正常人骨髓涂片10例作为对照,其中男3例,女7例,中位年龄40岁;按照WHO诊断标准对RA重新分型,6例难治性贫血(WHO-RA)、12例难治性血细胞减少伴有多系发育异常(RCMD)。2.采用骨髓涂片提取RNA,通过荧光定量RT-PCR方法,对其WT1表达水平进行检测,以β-actin表达作为内对照, WT1/β-actin比值作为WT1的相对表达量。3.实验数据用spss软件进行统计学分析。结果1.正常人骨髓涂片WT1的相对表达量为2.75×10-6±20.0,RA组为3.87×10-5±30.2,RAEB组为1.06×10-3±4.707,RAEBt组为1.35×10-2±6.100,两两相比有显著性差异,且WT1基因的表达水平与MDS病人的疾病进展呈正相关关系。2.WT1与MDS患者的原始细胞百分数之间有显著相关性(Spearman’s相关分析,r=0.64)。3.回顾诊断的RA,其WT1表达水平显著高于正常对照组。4.回顾分析RA的疾病进展过程,半年内发展为RAEB/RAEBt的RA患者,其WT1表达明显高于半年内病情稳定的RA患者;同一患者从RA发展到RAEB时,WT1表达水平增长一个对数级以上;在RA期间,WT1表达水平的波动小于一个对数级。5.WHO分型中,RCMD组的WT1转录水平(1.73×10-4)明显高于WHO-RA(1.92×10-6,P﹤0.05)。结论1.储存骨髓涂片可以提取RNA,通过荧光定量RT-PCR方法检测WT1基因,为疾病的回顾性研究提供了新的检测方法。2. WT1基因可作为MDS疾病进程的标志物。3.对形态学未明确诊断而临床高度怀疑MDS的患者,若WTI表达水平比正常对照平均值高两个对数级提示可能诊断为RA;对RA患者,若WT1表达水平>1个对数级的上升提示MDS近期内可能发生疾病进展。由于例数有限,尚有待进一步证实。4.WHO分型中,RCMD与WHO-RA的WT1表达水平之间有差异。
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