论文部分内容阅读
动物血液是一种重要的生物资源，从一种生物原料中提取多种生物物质是生物生化分离工程的一个重要研究方向。本文采用层析纯化集成技术联合制备牛血超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶和血红蛋白，得到了一条以聚乙二醇(PEG)伴随式离子交换层析和疏水性相互作用层析为基本方法的易于放大的工艺路线。
首先利用PEG伴随式离子交换层析一步分离牛血SOD、过氧化氢酶和血红蛋白。选用QSepharoseBigBeads为层析介质，并采用PEG600作为层析伴侣，使血红蛋白直接透过，而SOD和过氧化氢酶被吸附，然后通过盐浓度梯度洗脱分离SOD和过氧化氢酶组分。透过的血红蛋白纯度纯度达到99.9％，总收率为88.7％。
在SOD和过氧化氢酶的层析精制过程中，考察了阳离子交换层析和疏水层析的纯化效果，并选择了疏水层析。首先利用静态吸附实验综合比较了ButylSepharose4FF、OctylSepharose4FF和PhenylSepharose6FF三种疏水介质，并选用ButylSepharose4FF进行层析。采用吸附SOD粗品中的杂蛋白，使亲水性的SOD透过的方式纯化SOD，而过氧化氢酶则通过盐浓度梯度洗脱收集，最后将得到的两种酶组分用G25凝胶过滤柱脱盐。两种酶产品在SDS-PAGE分析中均呈单条带。HPLC分析显示纯化后的SOD和过氧化氢酶的纯度分别为77.6％和81.9％。两种酶的活力分别达到15932u/mg和65918u/mg，而收率分别为47.4％和29.6％。
与传统的SOD和过氧化氢酶制备方法比较，本工艺由于不使用有机溶剂，可避免环境污染、牛血过氧化氢酶活性损失严重等问题，同时可以回收血红蛋白，不仅实现了原料的充分利用，而且有可能降低这三种蛋白质的制备成本。