沉默miR-21对卵巢癌顺铂耐药细胞耐药性的影响及其机制研究

• 作 者: 刘德春
• 机 构: 青岛大学
• 出 处: 青岛大学
• 发表日期: 2016年4期
• 关键词: 卵巢癌

目的：研究微小RNA-21(miR-21)对卵巢癌顺铂耐药细胞耐药性的影响以及相关的调节机制。
　　方法：以慢病毒为载体，将合成的miR-21抑制物（miR-21-IN）及阴性对照序列（miR-21-NC）分别转染至人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP，并作为实验组和阴性对照组。另设未转染的人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP组和未转染的人卵巢癌敏感细胞SKOV3组作为对照。应用实时荧光定量PCR技术（Q-PCR），检测各组细胞中miR-21的表达情况；CCK-8法检测顺铂作用后各组细胞的增殖情况并分析各组细胞对顺铂的耐药性；流式细胞法检测各组细胞受顺铂（10ug/ml）作用后发生凋亡的情况；蛋白印迹法检测各组细胞内与PI3K/AKT信号传导通路相关的PTEN、PI3K、p-AKT及AKT蛋白的表达水平。
　　结果：（1）SKOV3/DDP细胞中miR-21的表达量为1.00±0.05，明显高于SKOV3细胞（0.10±0.03，P<0.01）。转染miR-21抑制物后，SKOV3/DDP细胞中miR-21相对表达量（0.30±0.03）较前明显下降，显著低于阴性对照组（0.98±0.06，P＜0.01）。（2）顺铂对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度IC50为9.96±0.05ug/ml，明显高于敏感组SKOV3细胞（2.83±0.04ug/ml，P＜0.01）；转染miR-21抑制物后，SKOV3/DDP细胞IC50明显下降，与阴性对照组相比，差异具有显著性（5.24±0.06ug/mlvs9.83±0.10ug/ml，P＜0.01）。（3）经10ug/ml顺铂作用48小时，检测SKOV3/DDP细胞凋亡率为（48.47±1.23）%，明显低于SKOV3细胞[（69.08±1.73）%，P＜0.01]。转染miR-21抑制物后，SKOV3/DDP细胞凋亡率（62.40±0.98%）较转染前明显升高（P＜0.01），与阴性对照组相比（47.02±2.42）%，差异具有显著性（P＜0.01）。（4）SKOV3/DDP细胞中PTEN蛋白表达水平为1.00±0.04，明显低于SKOV3细胞（1.43±0.05，P＜0.01），而PI3K蛋白（1.00±0.04）和p-AKT蛋白（1.00±0.03）则明显高于SKOV3细胞（0.62±0.03、0.51±0.06，P＜0.01）。转染miR-21抑制物后，SKOV3/DDP细胞中PTEN蛋白表达水平较转染前显著增加，而PI3K蛋白和p-AKT蛋白表达则较前明显下降，与阴性对照组相比，差异均有统计学意义(P＜0.01)。
　　结论：miR-21的异常表达与卵巢癌顺铂耐药密切相关。高表达的miR-21可能通过抑制靶基因PTEN蛋白表达，激活PI3K-AKT抗凋亡传导通路，促进卵巢癌顺铂耐药的发生。