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目的：
本研究复制肝硬化门静脉高压大鼠模型，在给予一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸（L-NAME）和血红色氧和酶-1（HO-1）的抑制剂锌原卟啉（ZnPP）同时阻断内源性一氧化氮（NO）、一氧化碳（CO）的表达及非阻断内源性一氧化氮、一氧化碳的表达两种情况下，分别将内源性硫化氢(H2S)生成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的抑制剂炔丙基甘氨酸（PPG）应用于肝硬化门静脉高压大鼠抑制H2S的生成，观察H2S减少对门静脉压力（PVP）的影响及H2S/CSE体系、NO/NOS体系、CO/HO-1体系的变化。探讨H2S在肝硬化门静脉高压中的作用及H2S/CSE体系、NO/NOS体系、CO/HO-1体系在肝硬化门静脉高压发生、发展中的相互调节作用。为进一步研究肝硬化门静脉高压的发生、发展机制提供理论和实验依据。
材料和方法：
1.肝硬化门静脉高压大鼠模型制备及干预剂给予：采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型。将64只雌性SD大鼠随机分为8组（n=8）：肝硬化组、肝硬化+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组。肝硬化+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组大鼠每日腹腔内注射PPG30mg/kg。正常+ZnPP+L-NAME组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组大鼠每日皮下注射ZnPP20μmol/kg、腹腔注射L-NAME5mg/kg.，肝硬化组及正常组大鼠每日腹腔注射等量生理盐水，共1周。各组大鼠饲养条件相同。
2.结果观察：应用苏木素-伊红染色观察肝组织病理形态学变化；门静脉导管法测定PVP；用敏感硫电极法测定门静脉血浆中H2S含量；用硝酸还原酶法测定门静脉血浆中NO含量；用双波长分光光度计法测定门静脉血浆中CO含量；应用免疫组化法观察门静脉CSE、HO-1、NOS（iNOS、eNOS）蛋白的表达，并用计算机图像分析技术半定量检测其蛋白表达的强弱；采用Westen-blot检测肝组织CSE、HO-1、iNOS、eNOS蛋白的表达，用凝胶成像分析系统半定量检测蛋白的表达水平。实验结果计量资料采用SPSS 13.0软件描述实验数据特征，作单因素方差分析、Student-Newman-Keuls检验，P<0.05示差异有统计学意义。
结果：
1.肝硬化门静脉高压大鼠模型建立：病理学观察证实肝硬化大鼠模型制备成功，PVP大于1.57Kpa，显示门静脉高压形成。
2.门静脉压力的测定：大鼠PVP肝硬化组较正常组升高(P<0.05)；肝硬化+PPG组较肝硬化组升高(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组较肝硬化组升高(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组较肝硬化组降低(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组较肝硬化+PPG组降低，较肝硬化+ZnPP+L-NAME组升高(P<0.05)。正常组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME组之间PVP无明显差异(P＞0.05)。
3.血浆中H2S、NO、CO的检测：①大鼠门静脉血浆H2S含量：肝硬化组低于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组低于正常组 (P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组 (P<0.05)。②大鼠门静脉血浆NO、CO含量：肝硬化组高于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组低于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。
4.肝组织与门静脉CSE、HO-1、iNOS、eNOS蛋白的表达：①大鼠肝组织与门静脉中CSE蛋白表达：肝硬化组低于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组低于肝硬化组（P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组高于肝硬化组(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组(P<0.05)。正常+PPG组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。②大鼠肝组织与门静脉中HO-1、iNOS、eNOS蛋白表达：肝硬化+PPG组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组低于肝硬化组(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。③大鼠肝组织与门静脉中HO-1、iNOS蛋白表达：肝硬化组高于正常组(P<0.05)；eNOS蛋白表达：肝组织中肝硬化组低于正常组(P<0.05)，门静脉中肝硬化组高于正常组(P<0.05)。
结论：
1.采用四氯化碳复合因素法成功制备肝硬化门静脉高压大鼠模型。
2.内源性H2S减少可以加重门静脉高压，H2S不足可能是促进肝硬化门静脉高压形成的因素之一。
3.内源性H2S在肝硬化门静脉高压形成过程中发挥保护性调节作用。
4.内源性H2S/CSE体系与NO/NOS体系、CO/HO-1体系在肝硬化门静脉高压发生、发展中呈现相互的负性调节作用，共同参与肝硬化门静脉高压形成的调控机制。
本研究复制肝硬化门静脉高压大鼠模型，在给予一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸（L-NAME）和血红色氧和酶-1（HO-1）的抑制剂锌原卟啉（ZnPP）同时阻断内源性一氧化氮（NO）、一氧化碳（CO）的表达及非阻断内源性一氧化氮、一氧化碳的表达两种情况下，分别将内源性硫化氢(H2S)生成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的抑制剂炔丙基甘氨酸（PPG）应用于肝硬化门静脉高压大鼠抑制H2S的生成，观察H2S减少对门静脉压力（PVP）的影响及H2S/CSE体系、NO/NOS体系、CO/HO-1体系的变化。探讨H2S在肝硬化门静脉高压中的作用及H2S/CSE体系、NO/NOS体系、CO/HO-1体系在肝硬化门静脉高压发生、发展中的相互调节作用。为进一步研究肝硬化门静脉高压的发生、发展机制提供理论和实验依据。
材料和方法：
1.肝硬化门静脉高压大鼠模型制备及干预剂给予：采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型。将64只雌性SD大鼠随机分为8组（n=8）：肝硬化组、肝硬化+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组。肝硬化+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组大鼠每日腹腔内注射PPG30mg/kg。正常+ZnPP+L-NAME组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组、肝硬化+ZnPP+L-NAME组、肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组大鼠每日皮下注射ZnPP20μmol/kg、腹腔注射L-NAME5mg/kg.，肝硬化组及正常组大鼠每日腹腔注射等量生理盐水，共1周。各组大鼠饲养条件相同。
2.结果观察：应用苏木素-伊红染色观察肝组织病理形态学变化；门静脉导管法测定PVP；用敏感硫电极法测定门静脉血浆中H2S含量；用硝酸还原酶法测定门静脉血浆中NO含量；用双波长分光光度计法测定门静脉血浆中CO含量；应用免疫组化法观察门静脉CSE、HO-1、NOS（iNOS、eNOS）蛋白的表达，并用计算机图像分析技术半定量检测其蛋白表达的强弱；采用Westen-blot检测肝组织CSE、HO-1、iNOS、eNOS蛋白的表达，用凝胶成像分析系统半定量检测蛋白的表达水平。实验结果计量资料采用SPSS 13.0软件描述实验数据特征，作单因素方差分析、Student-Newman-Keuls检验，P<0.05示差异有统计学意义。
结果：
1.肝硬化门静脉高压大鼠模型建立：病理学观察证实肝硬化大鼠模型制备成功，PVP大于1.57Kpa，显示门静脉高压形成。
2.门静脉压力的测定：大鼠PVP肝硬化组较正常组升高(P<0.05)；肝硬化+PPG组较肝硬化组升高(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组较肝硬化组升高(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组较肝硬化组降低(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组较肝硬化+PPG组降低，较肝硬化+ZnPP+L-NAME组升高(P<0.05)。正常组、正常+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME+PPG组、正常+ZnPP+L-NAME组之间PVP无明显差异(P＞0.05)。
3.血浆中H2S、NO、CO的检测：①大鼠门静脉血浆H2S含量：肝硬化组低于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组低于正常组 (P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组 (P<0.05)。②大鼠门静脉血浆NO、CO含量：肝硬化组高于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组低于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。
4.肝组织与门静脉CSE、HO-1、iNOS、eNOS蛋白的表达：①大鼠肝组织与门静脉中CSE蛋白表达：肝硬化组低于正常组(P<0.05)；肝硬化+PPG组低于肝硬化组（P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组高于肝硬化组(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组(P<0.05)。正常+PPG组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。②大鼠肝组织与门静脉中HO-1、iNOS、eNOS蛋白表达：肝硬化+PPG组高于肝硬化组 (P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME组低于肝硬化组(P<0.05)；肝硬化+ZnPP+L-NAME+PPG组低于肝硬化组 (P<0.05)。正常+PPG组高于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME组低于正常组(P<0.05)；正常+ZnPP+L-NAME+PPG组低于正常组(P<0.05)。③大鼠肝组织与门静脉中HO-1、iNOS蛋白表达：肝硬化组高于正常组(P<0.05)；eNOS蛋白表达：肝组织中肝硬化组低于正常组(P<0.05)，门静脉中肝硬化组高于正常组(P<0.05)。
结论：
1.采用四氯化碳复合因素法成功制备肝硬化门静脉高压大鼠模型。
2.内源性H2S减少可以加重门静脉高压，H2S不足可能是促进肝硬化门静脉高压形成的因素之一。
3.内源性H2S在肝硬化门静脉高压形成过程中发挥保护性调节作用。
4.内源性H2S/CSE体系与NO/NOS体系、CO/HO-1体系在肝硬化门静脉高压发生、发展中呈现相互的负性调节作用，共同参与肝硬化门静脉高压形成的调控机制。