【摘 要】
：
防御素是广泛分布于动物和植物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,它在先天性免疫系统宿主防御机制中起着重要的作用。研究发现一些β-防御素基因在奶牛感染乳房炎时
论文部分内容阅读
防御素是广泛分布于动物和植物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,它在先天性免疫系统宿主防御机制中起着重要的作用。研究发现一些β-防御素基因在奶牛感染乳房炎时可在乳腺中诱导表达,表明在乳房炎发生时β-防御素可能在乳腺局部防御中发挥作用。本研究进行了β-防御素基因LAP的克隆与序列分析,构建了LAP基因的真核表达载体,并成功进行了真核融合表达。实验以患乳房炎的中国荷斯坦奶牛乳腺为材料,提取乳腺上皮细胞总RNA,根据GenBank中注册的牛β-防御素基因LAP的cDNA序列设计了5’端带有EcoRI和BamHI酶切位点的一对引物,采用RT-PCR技术扩增LAP基因的cDNA序列,并将其连接到pMDTM 19-T Simple载体中进行序列测定,将测序鉴定正确的克隆质粒命名为pMD19-T-LAP。生物信息学分析结果表明,本研究成功扩增出牛β-防御素基因LAP的编码区序列,大小为195bp,推导该序列编码64个氨基酸,并含有β-防御素的特征性分子结构即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基（C）。与已报道的牛β-防御素基因LAP cDNA（登录号:EF630358.1）序列进行比较,核苷酸同源性达98%,有三个碱基发生了变异,分别为核苷酸序列第196的A-G突变、第199和201位的T-C突变;氨基酸同源性为95%,三个突变碱基引起第63位Arg→Lys的变异,这种核苷酸的序列差异,可能是由于牛的不同品种之间的差异造成的。用EcoRI和BamHI双酶切重组克隆质粒pMD19-T-LAP,然后插入到pEGFP-C1载体的EcoRI和BamHI位点,构建了真核表达重组质粒pEGFP-C1-LAP,经质粒PCR、双酶切及测序鉴定,结果表明重组表达质粒pEGFP-C1-LAP构建成功。利用脂质体转染技术,将重组质粒转化到COS7细胞系,用荧光显微镜检测到增强型绿色荧光,分别提取重组质粒组和空载体对照组转染后细胞的总RNA,经RT-PCR检测表明重组质粒组LAP基因mRNA已经在COS7细胞内得到转录。本试验结果为进一步研究奶牛β-防御素基因LAP的表达特性、基因功能及表达产物的抑菌活性奠定了一定的基础,同时重组多肽治疗和预防奶牛乳房炎提供了基础资料。
其他文献
核能的投产和利用,为国产原材料在核电站的建设运行的各个阶段以及其他核设施中的使用,开辟了一个新的领域。本文致力于调查一种可能性,即如何利用国产非金属原材料,以便生产
认为,中学生是课程学习的主体者,也是教学的核心载体力量.这就要求教师在课程教学中关注学生的语言文化学习发展需要,注重培养学生的自主学习和主动探究的良好习惯,以提高他
摘 要： 书面表达能力是每一位初中学生应具备的技能之一。本文分析了目前初中学生在英语书面表达中存在的一些问题，并力求在平时的教学过程中通过为学生创造写作的机会、重视写作技巧的培养、重视作文批改的效率等途径提高初中生的英语书面表达能力。 关键词： 初中生 英语书面表达能力 提高策略 一、初中生书面表达现状 英语教学要求培养学生听、说、读、写技能及这四种技能综合运用能力，学生的英语口、笔头交
一、巷道支架载荷场的建立和简化开掘巷道或峒室后,支护体与围岩之间因应力重新分布而形成了一全新的力场——“支架载荷场”,支架载荷就是该场对支架的力的作用。设支架载
本文以对鸡危害最为严重的E.tenella为研究对象,对E.tenella新基因EtCDPK4特性、酶活性及在E.tenella发育过程中所执行的功能进行了研究和分析,为探讨E.tenella入侵宿主细胞
丁型冠状病毒(Deltacoronavirus)是2009年发现和在2011年正式划分的第四种冠状病毒属，其属内的病毒基因组特征与其他冠状病毒属有较大差异。猪丁型冠状病毒(porcine delta cor
一、系统设计理念及目的中波发射台智能化监控系统,是以科学的管理理念来代替“以人为本”的传统的管理模式.它是以可靠的监控设备,客观地、准确地评估发射机的运行状态,尽可
宫得健是本课题组依据现代中药研究资料及医学验方成功研制的一种治疗奶牛子宫内膜炎的纯中药制剂。为进一步优化方剂、提高疗效,本研究对原方进行了修改,重组了两个改进方(
摘 要： 本文通过对现场和比赛录像观察设计，运用大量翻阅文献资料等研究方法，探析了篮球运动中身体接触的现实性和重要作用，并总结了在训练中应注意的几个问题。 关键词： 篮球运动 接触与对抗 训练 一、引言 篮球运动是运动员之间直接对抗的竞赛项目。比赛中攻、守之间的激烈对抗，促进了篮球运动的发展。所以说，全面的、强烈的对抗是现代篮球运动发展的显著特点之一。 人与人之间的身体接触、直接冲撞是
慢性热应激作为热应激的一种，随着全球气候的变暖，越来越受到人们的重视。国内外已有研究表明热应激不仅对动物的生长性能、繁殖性能造成影响，同样对机体免疫功能造成影响。但关