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慢性热应激作为热应激的一种,随着全球气候的变暖,越来越受到人们的重视。国内外已有研究表明热应激不仅对动物的生长性能、繁殖性能造成影响,同样对机体免疫功能造成影响。但关于慢性热应激对机体免疫功能影响方面的研究,却缺乏全面深入的研究报道。为此,本研究首先根据北京夏季的高温气候,以猪为实验动物设置了具有实践指导意义的慢性热应激环境条件。在此基础上从分子水平,采用免疫组织化学、ELISA、扫描电镜、流式细胞术等方法,研究了慢性热应激对猪外周血、脾脏及肠道中T细胞分布的影响,同时观察了对用口蹄疫核酸疫苗抗原刺激后小鼠的特异性的体液免疫和细胞免疫功能的变化。主要研究结果如下:
1.实验猪在39℃,4h/d,持续10天的环境条件下,脾脏及肠道中的HSP70表达量显著增加,日增重显著下降,证明此慢性热应激环境条件设置成功。对猪小肠的形态学观察结果表明:在慢性热应激条件下,小肠组织结构、超微结构及肠黏膜上皮中的AKP酶活性均发生了显著的变化,这些变化是实验猪日增重下降的重要形态学依据。
2.在慢性热应激条件下,实验猪血清中IFN-γ水平显著下降,IL-4水平稍有下降,IL-2水平显著上升,TNF-α水平有所上升,IFN-γ/IL-4比值下降:脾脏中CD3+和CD4+T细胞数量均显著上升,CD8+T细胞数量基本不变,CD4+/CD8+比值上升;小肠中CD3+T细胞数量显著上升。这些结果表明:慢性热应激时,实验猪体内的T细胞及相关细胞因子均发生了明显的变化,提示慢性热应激时,机体的免疫功能,尤其是细胞免疫功能处于紊乱状态。
3.在慢性热应激条件下,小鼠免疫口蹄疫核酸疫苗后,血清总IgG和IgG1的水平下降不明显,IgG2a的水平显著下降;特异性T细胞增殖反应水平显著降低;脾脏中CD4<+>IFN-γ<+>和CD8<+>IFN-γ<+>的表达量显著降低,CD4<+>IL-4<+>表达量基本无变化;体内CTL,反应水平显著下降(机体对靶细胞特异性的杀伤率从43.2%下降到26.2%)。这些结果表明,慢性热应激主要降低了机体的细胞免疫功能,对体液免疫功能影响不显著。
上述结果从分子水平揭示了:慢性热应激通过影响实验猪外周血、脾脏及肠道中的T细胞数量、分布及相关细胞因子的表达,破坏了机体的免疫平衡,使机体的免疫功能处于紊乱的状态;慢性热应激降低了口蹄疫核酸疫苗在小鼠上的免疫效果,其中以抑制细胞免疫反应为主,体液免疫反应为辅。本研究首次从分子水平揭示了慢性热应激条件下,机体免疫功能的变化情况,为认识热应激发生的机制提供了新的有价值的资料,为寻求应激性疾病的防护措施提供了新的理论依据。