β-内酰胺酶基因对肺炎克雷俾菌抗生素耐药率及耐药水平影响的研究

• 作 者: 陈杨
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 肺炎克雷伯菌 β-内酰胺酶基因 抗生素 耐药机制

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，K.pneumoniae)是医院和社区感染常见的革兰阴性杆菌，当机体抵抗力降低或者应用免疫抑制剂以及长期大量使用抗生素导致菌群失调时可引起肺部感染、尿路感染、菌血症等感染症状，在台湾地区的糖尿病患者中，还常导致化脓性肝脓肿(liver abscess)。目前发现，肺炎克雷伯菌对多种抗生素耐药现象严重，对同一种抗生素而言，不同菌株间的耐药水平差异也很大。超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamase，ESBL)至今仍是引起肺炎克雷伯菌耐药的最主要机制。　　目的：本研究旨在利用遗传学手段，分析产ESBL菌株在肺炎克雷伯菌中的分布和种类、β-内酰胺酶基因在产ESBL菌株中的地位和作用以及β-内酰胺酶基因型别的分布、mRNA表达对肺炎克雷伯菌临床菌株抗生素耐药水平的影响。　　方法：黑龙江省哈尔滨地区四所医院收集肺炎克雷伯菌临床分离菌株233株，采用双K-B药敏纸片协同的表型检测法检测产ESBL阳性菌株、分析ESBL产生对18种临床常见抗生素耐药率的影响，PCR法检测产ESBL菌株中BLA基因型别；随机选取其中56株临床菌株，用MIC法分别检测不同抗生素耐药水平，PCR法检测菌株中β-内酰胺酶基因分布，PCR产物测序确定BLA基因亚型及其启动子易突变区序列，分析β-内酰胺酶基因与肺炎克雷伯菌耐药水平之间的关系；通过逆转录PCR检测blaCTX-M基因在菌株中的差异表达，分析blaCTX-M基因mRNA表达在抗生素耐药水平差异上所起的作用。　　结果：233株肺炎克雷伯菌临床菌株中，产ESBL菌株检测到122株，占总体菌株的52.36％，临床菌株对七大类18种常见抗生素的耐药率在13.93％～88.25％之间，分别高于非产ESBL菌株对各种抗生素耐药率(3.60％～46.85％)，差异具有统计学意义；产ESBL临床菌株中，blaSHV携带率为59.84％(73/122)，blaCTX-M分离出78株，所占比例为63.93％，携带blaTEM基因的菌株60株，占49.18％。随机选取其中56株临床菌株，发现青霉素类抗生素氨苄西林的耐药水平存在明显差异(MIC值范围4μg/ml～≥1024μg/ml)，其中高水平耐药菌株(MIC≥1024μg/ml)占58.93％(33/56)。携带blaSHV基因和blaTEM基因的菌株中，对氨苄西林的高水平耐药率分别为62.16％和76.92％，与未携带该耐药基因菌株的耐药率(分别为83.33％，63.89％)相比，无明显差异(P>0.05)；而携带blaCTX-M基因菌株对氨苄西林的高水平耐药率明显高于未携带该基因菌株(100％与46.67％，P<0.01)，blaCTX-M基因mRNA高表达菌株耐药水平(MIC值)高于mRNA低表达或不表达菌株。　　结论：哈尔滨地区感染症患者中分离的肺炎克雷伯菌，产ESBL的比率为52.36％，其中以blaSHV、blaCTX-M和blaTEM基因分布为主，具有复合型产酶株；产ESBL仍是肺炎克雷伯菌抗生素耐药的主要机制之一，blaSHV基因影响肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率，而blaCTX-M基因及其表达引起肺炎克雷伯菌对氨苄西林及头孢噻肟耐药水平的增强。