【摘 要】
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目的: 1.观察新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养2h、4h、12h、24h后光镜下的形态学改变、两者的黏附及融合情况。2.比较实验组(新生隐球菌与HaCaT细胞共培养24h)与对照组(Ha
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目的: 1.观察新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养2h、4h、12h、24h后光镜下的形态学改变、两者的黏附及融合情况。2.比较实验组(新生隐球菌与HaCaT细胞共培养24h)与对照组(HaCaT细胞单独培养24h)基因表达水平的改变,筛选差异表达基因,了解新生隐球菌与HaCaT细胞体外相互作用的分子机制。方法: 1.原代HaCaT细胞经2-3代传代培养,生长至95%融合贴壁,调整细胞浓度为1×106-7个/ml,再加入密度为lx107-8个/mL的菌悬液或新鲜配置的细胞培养液,混合后于37℃5%CO2培养箱中共培养24h,不同时间点相差显微镜下观察。2.人全基因组表达谱芯片检测实验组与对照组差异表达基因并分析。结果:1.随时间延长HaCaT细胞与新生隐球菌发生黏附及融合,未见明显碎裂破坏等现象。2.实验组与对照组在基因表达水平共有138条基因发生表达上调,其中127条为已知基因,11条为未知基因,涉及细胞黏附与内吞、细胞凋亡、转录调控及信号转导、氨基酸残基磷酸化等多个生物学进程,可能与新生隐球菌侵袭HaCaT细胞的过程有关。讨论:新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养条件下可以发生黏附内吞,同时HaCaT细胞自身凋亡增加,这可能是由于隐球菌诱导HaCaT细胞相关基因表达上调所致,由此我们认为新生隐球菌感染HaCaT细胞后被其黏附内吞,并造成HaCaT细胞自身死亡是皮肤隐球菌病发生的可能机制。
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