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卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vg)是卵黄蛋白(Yolk protein)的前体，它特异存在于卵生雌性动物中。脊椎动物肝脏在雌激素的刺激下产生Vg，随后Vg被分泌到血液中并随血液循环系统进入卵巢，被卵巢吸收后分解成卵黄脂磷蛋白(lipovitellin)和卵黄高磷蛋白(phosvitin)，为胚胎和幼体生长发育提供能量与营养物质。Vg通常情况下只存在于雌性动物中，但是在17β-雌二醇(17-β-estradiol，E2)的诱导下，雄性成体以及未性成熟的幼体也可以表达Vg。另一方面，在抗雌激素如它莫西芬(Tamoxifen，TMX)的诱导下，雌性动物的Vg表达会被抑制。目前，越来越多的研究表明，Vg除了可以为胚胎发育提供营养以外，还具有其它生物学功能。其中，免疫防御是比较受关注的一项功能。体外实验已经证明Vg具有识别病原模式相关分子的功能，并且具有凝血活性和抑菌活性。然而关于Vg在体内是否具有免疫防御的作用，目前还知之甚少。因此，本文从以下几个方面探讨了Vg在体内的免疫防御作用：一、研究病原相关模式分子是否能够诱导雄性斑马鱼表达Vg以及所表达的Vg是否具有抑菌活性；二、研究当斑马鱼受到病原菌侵害时，Vg是否能够对斑马鱼起到一定的保护作用。
论文第一部分的研究表明，Vg是一种急性时相蛋白。在脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)和脂磷壁酸(lipoteichoic acid，IXA)的诱导下，雄性斑马鱼能够迅速表达Vg，表达模式类似于急性时相蛋白；并且诱导表达的Vg能够与细菌结合并具有抑菌活性。本文用腹腔注射法向雄性斑马鱼注射LPS和LTA，然后在注射后Oh、0.5h、1h、2h、3h、5h、9h和12h分别提取斑马鱼总RNA和血清。通过荧光实时定量PCR(Real-time PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测雄性斑马鱼Vg在mRNA和蛋白水平的表达情况。实验结果表明：注射LPS后，Vgl基因立即开始大量表达，在0.5h达到正常雄鱼的104.1倍，在2h达到峰值，为正常雄鱼Vgl基因表达量的193.2倍，并在此后所检测的12小时内维持在较高的表达水平。在注射LTA0.5h以后，雄鱼Vgl基因表达量达到正常雄鱼的45倍，此后的表达水平与对照组相当。对照组注射生理盐水后，Vgl基因表达量变化不大。在蛋白水平，Vg的表达量也有显著上升，注射LPS0.5小时后，血清Vg表达量即开始显著上升，为对照组的1.3倍；注射LTA5h后，Vg表达量开始显著上升，9h时血清中的Vg为对照组的1.2倍。由此可以看出，病原模式相关分子LPS和LTA能够有效诱导斑马鱼Vg表达。因此，斑马鱼Vg的表达模式具有急性时相反应的特点，是一种急性时相蛋白。本文应用Westernblotting检测了Vg是否能够与细菌结合。将LPS诱导0.5h的雄鱼血清分别与大肠杆菌(E．coli)和金黄色葡萄球菌(S．aureus)共同孵育，然后洗脱细菌上结合的蛋白，用洗脱下的蛋白进行western blotting，抗体为兔抗斑马鱼Vg多克隆抗体。结果表明，Vg与大肠杆菌(E．coli)和金黄色葡萄球菌(S．aureus)都能结合。本文用LPS诱导0.5h的雄性斑马鱼血清(Vg含量高)进行抑菌实验，结果表明：它对大肠杆菌(E．coli)和金黄色葡萄球菌(S．aureus)抑菌能力分别比对照组高6.8％和6.6％；经过加热灭活补体后，对两种菌的抑菌能力比对照组分别高18.3％和11.4％；经过加热灭活补体，然后又加入不同量的Vg抗体以沉淀血清中的Vg，随着Vg抗体量的加大，血清的抑菌活性逐渐降低，在加入过量Vg抗体后，其抑菌活性与对照组无显著差异，与加入抗体之前的血清相比，对两种菌的抑菌活性分别降低18.6％和11.7％。由此可见，Vg的抑菌活性是显著的，而且其对革兰氏阴性菌的抑制率高于对革兰氏阳性菌的抑制率。
论文第二部分首先探索了E2和TMX合适的诱导浓度及诱导时间，目的是既能显著调控Vg表达量又不对斑马鱼造成损伤。结果表明：20 nM E2诱导斑马鱼20天后，Vg表达量显著上升，其肝实质细胞形态仍然保持正常，肝脏基本未受影响；500 nM TMX诱导斑马鱼20天后，Vg表达量显著下降，肝实质细胞形态也基本保持正常，肝脏功能未受影响。然后我们又研究了E2和TMX对斑马鱼免疫球蛋白IgM(Immunoglobulin M)和白细胞密度的影响，结果表明：E2和TMX都能够提高斑马鱼血清中IgM的水平，但是两者对IgM的诱导作用差别不大；E2和TMX对白细胞密度都无显著影响。最后我们用鳗弧菌V． auguillarum对20nM E2和500 nM TMX诱导20天的斑马鱼以及正常斑马鱼进行攻毒，实验结果表明：E2诱导的雌鱼的存活率显著高于正常雌鱼和TMX诱导的雌鱼；E2诱导的雄鱼的存活率与正常雄鱼相仿，但是显著高于TMX诱导的雄鱼。说明当斑马鱼受到病原菌入侵时，Vg可能对斑马鱼具有一定的保护作用。然而，由于激素对机体的作用比较复杂，关于Vg在体内免疫防护作用，还不能轻易下结论，还有待于进一步研究。
综上所述，本文发现斑马鱼Vg是一种急性时相蛋白，病原模式相关分子LPS和LTA能够诱导雄性斑马鱼表达Vg，其表达模式具有急性时相反应的特点；而且所表达的Vg具有抑菌作用。另外，实验表明，当斑马鱼受到病原菌入侵时，Vg可能对提高斑马鱼存活率有一定作用，但是这还需要进一步的研究加以确认。