【摘 要】
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目的：建立脊髓运动神经元特异表达人类野生型和突变型TDP-43的脊髓侧索硬化症(Amyotrophie lateral sclerosis，ALS)的转基因小鼠模型，观察突变TDP-43对小鼠运动神经元产生的影响
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目的：建立脊髓运动神经元特异表达人类野生型和突变型TDP-43的脊髓侧索硬化症(Amyotrophie lateral sclerosis，ALS)的转基因小鼠模型，观察突变TDP-43对小鼠运动神经元产生的影响，探索TDP-43突变导致神经退行性疾病的机制，观察转基因小鼠行为学，检测其神经系统病变对运动功能产生的影响。 方法：PCR扩增编码hTDP-43的基因片段，将其克隆到pBlue载体中，构建hTDP-43WT-pBlue质粒，利用点突变试剂盒在hTDP-43的Q331K和M337V两个位点进行突变，测序带有Q331K和M337V突变的cDNA，利用PstⅠ和SpeⅠ两个酶切位点将hTDP-43WT，Q33tK，M337V用T4连接酶连接到带有HB9启动子的表达载体上，构建出pHB9-hTDP-430331K，m37V-IRES-EGFP基因，利用XhoⅠ酶切位点将其线性化之后通过原核注射的方法注射入B6D2F2的原核中，再将发育到二细胞的受精卵移植入假孕的雌鼠中，获得hTDP-43转基因小鼠。出生的后代利用hTDP-43特异性引物进行PCR鉴定，利用免疫组织化学法观察脊髓运动神经元中TDP-43的定位及包涵体的形成。采用步态评估和悬挂实验观察转基因小鼠行为学的改变。 结果：获得人TDP-43突变转基因小鼠模型，其运动神经元胞质中TDP-43染色阳性，但未见TDP-43包涵体，正常小鼠神经元TDP-43染色呈阴性。小鼠行为学检测显示，转基因小鼠的步距与同龄正常小鼠相比明显下降(P<0.01)，步态宽度升高(P<0.05)，平衡抓握力明显下降(P<0.01)。 结论：利用PHB9启动子可以获得在运动神经元特异表达人TDP-43突变的转基因小鼠模型，小鼠模型发病起始时间晚，疾病呈进程性发展，转基因小鼠模型出现ALS的病理学特征，前后肢步态宽度及平衡抓握能力发生改变，实验表明运动神经元中hTDP-43的表达可以启动ALS疾病的发生，突变TDP-43对小鼠的运动能力产生影响。
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