低浓度奥沙利铂联合亚毒性剂量UCN-01对人结肠癌LoVo细胞增殖抑制作用及机制的研究

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目的:研究奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)与7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine,UCN-01)单独及联合应用对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用效果,探讨其对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用及其机制。  方法:以体外药敏实验(MTT方法)检测L-OHP、UCN-01单独及联合用药对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用效果;用CalcuSyn2.0软件计算药物半数抑制浓度(IC50),根据周氏中效原理计算不同浓度L-OHP和UCN-01以固定浓度组合的联合用药指数即CI值;流式细胞仪检测单独及联合用药对细胞周期以及凋亡的影响;Western-blot检测凋亡底物cleaved-PARP蛋白表达;HE染色法检测单独用药和联合用药后细胞形态的变化;  结果:L-OHP与UCN-01对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用,在一定浓度范围内呈浓度依赖性。奥沙利铂作用于人结肠癌LoVo细胞24h的IC50为51.2±3.3μmol/L(r=0.96)。UCN-01作用于LoVo细胞的IC50为828.4±171.7nmol/L(r=0.91)。6.25μmol/L的奥沙利铂作用于人结肠癌细胞LoVo细胞后,其增殖抑制率为3.64%,100 nmol/L的UCN-01作用于人结肠癌细胞LoVo后,其增殖抑制率为29.16%,6.25μmol/L的奥沙利铂与100 nmol/L的UCN-01联合后,对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制率为52.7%。流式细胞术结果显示,低浓度(6.25μmol/L)奥沙利铂能够诱导人结肠癌LoVo细胞发生凋亡,其凋亡比率为9.29%。联合用药后,其细胞凋亡比率为8.52%,较单独用药未见明显变化,而细胞死亡率为24.27%。低浓度奥沙利铂联合亚毒性剂量的UCN-01作用于人结肠癌LoVo细胞后,经HE染色发现细胞形态发生明显变化:联合用药后细胞沿长轴方向拉伸,拉伸的细胞相互交联,体积增大,出现约12.71%多核、巨核细胞,即发生丝裂灾变。  结论:L-OHP对人结肠癌LoVo细胞体外增殖抑制作用效果明显,其增殖抑制效果呈浓度依赖性。增加药物浓度,能够达到一定增殖抑制效果。与单独应用L-OHP或UCN-01相比较,两药联用作用于人结肠癌LoVo细胞,能够明显增强对细胞的增殖抑制效应,达到较高浓度奥沙利铂单独用药的效果,且用药浓度明显降低;联合用药较单独用药凋亡细胞比例未见明显增加,但死亡细胞所占比例明显增加,见多核、巨核细胞,出现凋亡以外的细胞死亡方式。
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