【摘 要】
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茉莉酸甲酯（Me JA）是香水重要的组成成分,它是一种有机酯类,可以释放花香类的挥发性有机化合物。Me JA在被子植物、裸子植物、蕨类植物和藻类中广泛分布,在植物受到胁迫、生长发育过程中都饰演着重要的角色。茶是世界上最受欢迎的无酒精饮品之一。由于不同的茶树品种、加工技术、茶树所处地理位置等因素都会导致茶叶的香气存在很大的区别。这些VOCs（Volatile Organic Compounds）在茶
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茉莉酸甲酯（Me JA）是香水重要的组成成分,它是一种有机酯类,可以释放花香类的挥发性有机化合物。Me JA在被子植物、裸子植物、蕨类植物和藻类中广泛分布,在植物受到胁迫、生长发育过程中都饰演着重要的角色。茶是世界上最受欢迎的无酒精饮品之一。由于不同的茶树品种、加工技术、茶树所处地理位置等因素都会导致茶叶的香气存在很大的区别。这些VOCs（Volatile Organic Compounds）在茶叶中的含量虽然微量,但是对茶叶的香气和品质都有着至关重要的作用。Me JA是赋予茶叶高品质的茶叶香气和滋味重要的化合物之一。据报道,用龙井43茶树品种叶片加工成六种茶（红茶、绿茶、黄茶、白茶、乌龙茶、黑茶）中,Me JA含量在红茶样品中最高。本文以红茶加工过程中香气化合物茉莉酸甲酯和其合成底物茉莉酸的变化规律作为启发点,克隆鉴定了茶树JMT（茉莉酸羧基甲基转移酶）基因—CsJMT,CsJMT具有催化Me JA合成的功能。通过生物信息学分析、亚细胞定位、原核表达、酶活检测、三维结构预测、定点突变、荧光实时定量等对CsJMT功能和表达特征进行研究,研究结果对茶叶香气Me JA的形成和调控赋予了新的认识,对提高红茶的香气品质奠定了理论研究基础。主要研究结果如下:（1）通过SPE和GC-MS方法对红茶加工过程中Me JA含量进行检测,发现Me JA含量在鲜叶、萎凋、揉捻、发酵过程中是处于上升增长的状态;同时提取红茶加工过程茶叶茉莉酸的含量,通过LC-MS来检测。发现JA的含量也呈现规律性变化趋势。（2）克隆出了两段完整的ORF,长度分别为1077 bp（ORF-1）、1161 bp（ORF-1）,重组蛋白pGEX-4T-1-ORF-1进行酶促反应发现以JA为底物时没有检测到Me JA;而重组蛋白p GEX-4T-1-ORF-2进行酶促反应发现以JA为底物时检测到Me JA,将ORF-2命名为CsJMT（登录号NW407182）。CsJMT与草莓（Fragaria vesca subsp.vesca）中的JMT同源性最高。对CsJMT三维结构进行了预测,确定其SAM/SAH结合位点底物结合位点,JA结合位点以及关键的催化氨基酸残基。（3）将重组载体pK7GWF2-CsJMT,导入农杆菌,将其注射入烟草叶片和拟南芥原生质体中进行瞬时表达,确定CsJMT定位在细胞质上。（4）对茶树中根、茎、芽、第一叶、第二叶、老叶、花和果中进行qRT-PCR,发现CsJMT在芽叶中表达量很高,在茶树第二叶表达量最高。红茶加工过程中（鲜叶、萎凋、揉捻、发酵）进行qRT-PCR发现红茶发酵样品中表达量最高。
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