【摘 要】
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本研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞（PGCs）作为研究对象,旨在了解白藜芦醇是否能够抵御AFB1对PGCs的毒害作用及其是否通过AKT/PI3K通路调控细胞增殖与凋亡。本实验分为四组,即空白组对照组、AFB1组、RES组、RES+AFB1组,并进行一系列检测实验,包括MTT检测细胞活力,荧光显微镜观察细胞形态变化及DAPI核染色变化情况,酶标仪检测细胞上清中葡萄糖浓度,试剂盒检测细胞活性氧（ROS）
【基金项目】
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国家自然科学基金（31572377）；
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本研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞（PGCs）作为研究对象,旨在了解白藜芦醇是否能够抵御AFB1对PGCs的毒害作用及其是否通过AKT/PI3K通路调控细胞增殖与凋亡。本实验分为四组,即空白组对照组、AFB1组、RES组、RES+AFB1组,并进行一系列检测实验,包括MTT检测细胞活力,荧光显微镜观察细胞形态变化及DAPI核染色变化情况,酶标仪检测细胞上清中葡萄糖浓度,试剂盒检测细胞活性氧（ROS）和膜电位变化情况,流式检测细胞凋亡率,qPCR检测凋亡基因（BAD/Bax/Bcl-2/XIAP/AIF）、Akt/PI3K通路及上下游关键基因（PI3K/Akt/PTEN/Fox O1/m TOR）等表达情况,Western Blot检测Akt/PI3K信号通路及下游相关分子的蛋白表达水平。取得结果如下:1.MTT法检测细胞活力结果显示8μM的RES浓度对细胞有最佳保护作用,0.7μM的AFB1浓度为最适攻毒浓度。2.显微镜观察细胞形态结果显示细胞经AFB1处理24h后,和空白组及RES组比较细胞形态明显发生变化,细胞间隙增大,大量细胞出现变圆死亡脱落现象,而RES干预AFB1组细胞和AFB1单独作用组比较,细胞收缩变圆现象有所缓解,并且形态相对较规整,可以明显看出RES对AFB1毒性有缓解作用。DAPI核染色也显示,AFB1组细胞核染色数量明显减少,且细胞核浓缩变小呈致密浓染,而RES+AFB1组较AFB1组可以明显看出,细胞核浓缩变小呈致密浓染的现象明显有所缓解。3.试剂盒检测细胞上清中葡萄糖浓度,并计算葡萄糖的消耗率,结果显示,与空白组和RES组相比,AFB1葡萄糖消耗率最低,而RES+AFB1组较AFB1组葡萄糖消耗率显著增加。4.活性氧（ROS）检测结果显示,与空白组和RES组相比,AFB1组细胞的活性氧水平显著升高,而RES+AFB1组较AFB1组,细胞的活性氧水平显著降低。细胞膜电位检测结果显示,与空白组和RES组相比,AFB1组细胞膜电位显著降低,而RES+AFB1组较AFB1组,细胞膜电位显著升高。5.Annexin V-FITC/PI流式分析检测,空白组、AFB1组、RES组、RES+AFB1组凋亡率分别为6.72%、38.78%、5.35%和15.82%,AFB1组细胞凋亡率最大,RES+AFB1组较AFB1组细胞凋亡率显著下降。6.qPCR和Western blot分析检测结果显示,RES可以影响Akt/PI3K信号通路上的相关基因来抑制AFB1诱导的细胞凋亡。通过以上结果可以看出,黄曲霉毒素B1可以引起猪卵巢颗粒细胞凋亡并且呈浓度相关性变化,而白藜芦醇则可以有效地缓解AFB1致PGCs的毒性作用;并且低浓度的RES对PGCs有增殖作用。同时,qPCR和Western blot分析检测结果显示,RES可以影响Akt/PI3K信号通路上的相关基因来抑制AFB1诱导的细胞凋亡。
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