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研究背景：
肝细胞癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,发病率居全球恶性肿瘤第6位、致死率居第3位。我国肝癌患者年死亡数多达30万,约占全球死亡数的53％,肝癌以其恶性程度高,病情进展快,死亡率高著称,我们在临床工作中发现的肝癌患者多为中晚期,即使行根治性手术,手术以后的五年生存率亦相当低,因此为了提高肝癌患者的生存率,积极探索有效的化疗手段对于肝癌的综合治疗显得尤为重要。
奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)是继顺铂、卡铂以后出现的第三代铂类抗肿瘤药物,它不仅改善了顺铂、卡铂的毒副作用,而且扩大了它们的抗癌谱。,对结直肠癌、胃癌、卵巢癌疗效确切,对乳腺癌、非小细胞肺癌、鼻咽癌、生殖器肿瘤等也有较好的疗效。与顺铂,卡铂相比具有更强大的抗肿瘤活性,且不良反应少,更容易被患者接受。聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribosepolymerase,PARP)是一种位于绝大多数真核细胞胞质中的蛋白质翻译后的DNA修复酶,作为一种DNA受损的修复酶,PARP在细胞DNA受到外界各种各样理化因素的刺激诱导损伤时则被激活；且PARP的激活与DNA的受到的损伤程度呈正相关。在DNA损伤所诱发的糖基化反应过程中,PARP能够通过加强对自身的修复作用而对PARP的活性进行负反馈调节,即形成DNA损伤所诱发的PARP活性循环。因此,PARP在DNA损伤修复与细胞凋亡中发挥着重要作用。
目前,国内外文献中很少见到奥沙利铂与原发性肝癌后PARP蛋白在其表达的报道,研究PARP蛋白的表达情况与人肝癌7721细胞的关系,将为探讨原发性肝癌的治疗,特别是化疗药物的治疗提供新的思路,并为原发性肝癌的治疗提供新的靶点。
目的
本研究通过体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,研究奥沙利铂诱导后细胞的增殖及凋亡,以及其对细胞凋亡终末通路PARP蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂抗肝癌细胞的作用机制,为其辅助治疗肝癌提供实验依据。
方法：
对肝癌细胞株SMMC-7721进行体外培养,应用L-OHP处理肝癌细胞,采用MTT方法测定肝癌细胞的增殖率,蛋白质印迹(Western blot)检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的情况。实验数据应用SPSS16.0统计软件进行分析,用(x)±s表示,采用单因素方差分析,用Dunnett t检验进行组间比较,以α=0.05作为显著性检验水准。
结果：
MTT检测显示L-OHP处理24,48和72 h后SMMC-7721细胞IC50分别为20、11.4和7.58 ng/μl,在24小时时间段比较不同浓度组和对照组的细胞抑制情况,结果显示较高浓度组的L-OHP对细胞抑制情况显著高于对照组(P<0.05)；同样在48小时和72小时时间段比较不同浓度组和对照组的细胞抑制情况,结果均显示较高浓度组的L-OHP对细胞抑制情况显著高于对照组(P<0.05),统计结果均具有显著的差异。经过L-OHP处理的细胞可以观察到典型的凋亡细胞形态:包膜完整,体积皱缩,核染色质边集。Western blot结果显示,L-OHP30μg/ml处理8、12、17、20和24 h后,在SMMC-7721肝癌细胞中检测到PARP蛋白随着时间的延长逐渐裂解。
结论：
L-OHP具有较强的抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡作用。L-OHP的抗肝癌作用机理可能是通过诱导PARP蛋白的裂解,从而诱导肝癌细胞凋亡。