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研究目的：
检测中电导钙激活钾离子通道(intermediate-conductancecalcium-activatedpotassiumchannelprotein,SK4/IK-1/KCa3.1/KCNN4)在甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)组织及细胞中的表达情况并探讨SK4与PTC临床病理特征的关系；通过SK4特异性抑制剂(TRAM-34)下调SK4的表达后，观察SK4对PTC细胞集落形成、增殖和迁移能力的影响并分析其可能存在的分子机制。
实验方法：
1、通过分析GEO数据库GSE3678和GSE3467基因芯片、收集的甲状腺乳头状癌组织及细胞株中SK4的表达情况，确定SK4在PTC中的表达水平同时对比研究SK4蛋白表达与PTC临床病理特征的关系。
2、通过SK4特异性抑制剂(TRAM-34)下调SK4的表达后,采用平板克隆和CCK-8实验检测SK4对PTC细胞集落形成和增殖能力的影响。
3、通过Transwell迁移实验检测SK4对PTC细胞迁移能力的影响。
4、利用WesternBlot实验检测TRAM-34阻断SK4通道后，上皮-间充质转化(epithelial–mesenchymaltransition,EMT)过程相关蛋白水平，探讨SK4可能参与调控肿瘤细胞迁移的作用机制。
实验结果：
1、GEO数据库GSE3678和GSE3467基因芯片、收集的甲状腺乳头状癌组织及细胞株中SK4均为高表达。免疫组化结果显示SK4阳性率明显高于正常甲状腺组织，然而其蛋白阳性表达率与PTC患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征之间并无显著统计学意义(P＞0.05)。
2、CCK-8实验结果表明，SK4特异性抑制剂TRAM-34剂量依赖性地抑制PTC细胞株CGRHW-3细胞增殖,差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3、平板克隆实验结果显示相比于阴性对照组，SK4特异性抑制剂TRAM-34显著抑制CGRHW-3细胞集落形成能力(P＜0.01)。
4、Transwell迁移实验表明在阻断SK4通道后，PTC细胞株CGRHW-3细胞迁移能力下降(P＜0.05)。
5、WesternBlot实验结果提示，在下调SK4表达后，EMT过程受到抑制，其中上皮细胞表型相关蛋白如E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达上调，间质细胞表型相关蛋白如N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达下调。同时，上皮间充质转化(EMT)相关转录因子如ZEB1表达下调。
实验结论：
1、甲状腺乳头状癌组织及细胞中SK4转录及翻译水平均呈高表达，提示SK4在甲状腺乳头状癌的发生发展中发挥了一定的作用。
2、药理学阻断SK4通道后，PTC细胞株CGRHW-3细胞集落形成、增殖及迁移能力显著受抑制。
3、SK4表达量的下调阻止了EMT过程，该结果提示SK4或许通过EMT通路调节甲状腺乳头状癌的迁移过程，药理学阻断SK4通道后，可抑制甲状腺乳头状癌迁移。SK4有望成为PTC新的治疗靶点。
检测中电导钙激活钾离子通道(intermediate-conductancecalcium-activatedpotassiumchannelprotein,SK4/IK-1/KCa3.1/KCNN4)在甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)组织及细胞中的表达情况并探讨SK4与PTC临床病理特征的关系；通过SK4特异性抑制剂(TRAM-34)下调SK4的表达后，观察SK4对PTC细胞集落形成、增殖和迁移能力的影响并分析其可能存在的分子机制。
实验方法：
1、通过分析GEO数据库GSE3678和GSE3467基因芯片、收集的甲状腺乳头状癌组织及细胞株中SK4的表达情况，确定SK4在PTC中的表达水平同时对比研究SK4蛋白表达与PTC临床病理特征的关系。
2、通过SK4特异性抑制剂(TRAM-34)下调SK4的表达后,采用平板克隆和CCK-8实验检测SK4对PTC细胞集落形成和增殖能力的影响。
3、通过Transwell迁移实验检测SK4对PTC细胞迁移能力的影响。
4、利用WesternBlot实验检测TRAM-34阻断SK4通道后，上皮-间充质转化(epithelial–mesenchymaltransition,EMT)过程相关蛋白水平，探讨SK4可能参与调控肿瘤细胞迁移的作用机制。
实验结果：
1、GEO数据库GSE3678和GSE3467基因芯片、收集的甲状腺乳头状癌组织及细胞株中SK4均为高表达。免疫组化结果显示SK4阳性率明显高于正常甲状腺组织，然而其蛋白阳性表达率与PTC患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征之间并无显著统计学意义(P＞0.05)。
2、CCK-8实验结果表明，SK4特异性抑制剂TRAM-34剂量依赖性地抑制PTC细胞株CGRHW-3细胞增殖,差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3、平板克隆实验结果显示相比于阴性对照组，SK4特异性抑制剂TRAM-34显著抑制CGRHW-3细胞集落形成能力(P＜0.01)。
4、Transwell迁移实验表明在阻断SK4通道后，PTC细胞株CGRHW-3细胞迁移能力下降(P＜0.05)。
5、WesternBlot实验结果提示，在下调SK4表达后，EMT过程受到抑制，其中上皮细胞表型相关蛋白如E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达上调，间质细胞表型相关蛋白如N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达下调。同时，上皮间充质转化(EMT)相关转录因子如ZEB1表达下调。
实验结论：
1、甲状腺乳头状癌组织及细胞中SK4转录及翻译水平均呈高表达，提示SK4在甲状腺乳头状癌的发生发展中发挥了一定的作用。
2、药理学阻断SK4通道后，PTC细胞株CGRHW-3细胞集落形成、增殖及迁移能力显著受抑制。
3、SK4表达量的下调阻止了EMT过程，该结果提示SK4或许通过EMT通路调节甲状腺乳头状癌的迁移过程，药理学阻断SK4通道后，可抑制甲状腺乳头状癌迁移。SK4有望成为PTC新的治疗靶点。