论文部分内容阅读
该课题组前期在探讨癌细胞来源Ig分子的生物学活性时发现,用抗人IgG的抗体在体外可明显地诱导肿瘤细胞的凋亡;同样该抗体在体内可明显地抑制人宫颈癌细胞系(HeLa MR)在裸鼠体内的成瘤和生长.提示癌细胞来源的Ig对于肿瘤细胞的生长乃至生存具有重要作用.为了进一步探讨恶性肿瘤细胞表达的Ig生物学活性及抗体封闭效应的可能机制,我们进行了如下探讨.一、进一步确认抗人IgG和抗人IgM对肿瘤细胞诱导凋亡的效应首先,我们在前期实验的基础上,规范了抗体及正常Ig分子的来源,即抗22人IgG、IgM、正常人IgG及羊IgG均使用Sigma公司的产品,进一步以羊IgG为对照,分别观察了羊抗人IgG及羊抗人IgM抗体在培养上清中及细胞内诱导肿瘤细胞凋亡的作用.通过对HeLa S3(人宫颈癌)、HeLa MR、HT-29(人结肠癌)、MCF-7(人乳腺癌)、A549(人肺腺癌)五个肿瘤细胞系的抗体封闭实验观察,我们发现,在培养基中加入抗人IgG抗体后,能明显观察到HeLa S3、HeLa MR、HT-29肿瘤细胞的凋亡,而对MCF-7、A549没有明显促凋亡作用.在培养上清中加入抗IgM抗体后,对五种细胞系都没有发现其促凋亡作用.进而我们通过原位电转的方法将抗人IgG、抗人IgM抗体转入MCF-7细胞内,发现二者均对MCF-7有明显的促凋亡作用.这些实验说明,封闭HeLa S3、HeLa MR、HT-29肿瘤细胞膜上的IgG或封闭MCF-7细胞内的IgG及IgM都能明显诱导肿瘤细胞的凋亡.进一步说明了肿瘤来源的Ig分子,特别是IgG分子的存在对肿瘤细胞的生存是非常重要的.二:探讨肿瘤细胞外抗体封闭效应的可能机制:上述实验已经明确抗人IgG在肿瘤细胞内及加入到肿瘤细胞培养上清中都能明显诱导肿瘤细胞的凋亡,进一步我们的研究就以肿瘤细胞外抗体封闭效应的可能机制为切入点,探讨了抗人IgG在体外培养的条件下,是否是通过膜结合方式发挥效应的,其作用机制是什么?三:免疫共沉淀方法证明抗人IgG能够与肿瘤细胞IgG特异性结合并寻找肿瘤来源的IgG相互作用蛋白我们分别提取了不同肿瘤细胞系的总蛋白和膜蛋白,用抗人IgG和抗人IgM的抗体进行了免疫共沉淀实验,SDS-PAGE及Western blot结果显示与羊IgG及抗人IgM相比,抗人IgG抗体能够有效地与肿瘤来源的IgG分子结合,又一次在蛋白水平证明了肿瘤细胞表达一定量的IgG分子,并明确了抗人IgG诱导肿瘤细胞凋亡的生物学效应是通过与IgG特异性结合实现的.更有意义的是,我们还进一步确认了前期结果的提示,即肿瘤来源的IgG分子在还原状态下与正常人血清24来源的IgG抗原性不相同,但在非还原状态下与正常人IgG是一致的.综合以上结果,我们用抗体封闭实验进一步确认了抗人IgG和抗人IgM对肿瘤细胞诱导凋亡的效应;初步探讨了抗人IgG抗体封闭效应的可能机制,并通过免疫共沉淀和质谱分析对肿瘤来源的IgG相互作用蛋白了进行了初步的探讨;我们相信肿瘤来源的IgG这种生物学活性的发现,对肿瘤发生与发展的生物学研究及以肿瘤细胞表达的Ig分子做为靶点的肿瘤生物治疗研究都会产生重要的影响.