贵阳及其周边地区动物弓形虫感染的初步调查及弓形虫地理株的分离与基因型鉴定

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目的:  以贵阳及其周边地区猫、猪和狗等动物弓形虫感染的流行病学调查为基础,分离弓形虫虫株,鉴定该地理区域内弓形虫的基因型,为贵州省弓形虫的防治工作提供依据。  方法:  1.采集圈养猪、家养狗和流浪猫的外周血或心脏及脑组织样本。  2.采用 ELISA法检测血浆中的弓形虫抗原 CAG、抗弓形虫抗体 IgG、IgM;PCR检测弓形虫特异性核酸序列529bp。结合弓形虫抗原、抗弓形虫抗体、弓形虫DNA检测,作为判断弓形虫感染的依据。  3.选择经确认弓形虫感染的动物组织样本,采用小鼠腹腔接种分离弓形虫虫株。  4.采用PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)和基因测序技术分析弓形虫DNA样本的SNP(单核苷酸多态性),鉴定研究区域内的弓形虫基因型。  结果:  1.采集猪70头,家养狗107只,流浪猫19只。血清学检测发现,抗弓形虫IgG抗体阳性率猪为70%,狗为20.56%,猫为63.16%;抗弓形虫IgM抗体阳性率猪为0,狗为0.93%,猫为21.05%;弓形虫循环抗原(CAG)阳性率猪为16.88%,狗为13.08%,猫为10.53%。PCR扩增弓形虫529bp特异性片段,其阳性率猪为31.51%,狗为3.74%,猫为52.63%。综合弓形虫抗原、核酸和抗弓形虫抗体的检测结果,动物弓形虫感染率平均为55.61%,其中猪为80%,家养狗为34.58%,流浪猫为84.21%。  2.基于弓形虫血清学和核酸检测结果,用小鼠腹腔接种法分离出5株弓形虫贵州地理株,这些弓形虫株有增殖慢、毒力低、易形成假包囊等生物学特点。  3.多重-巢式多位点PCR-RFLP和基因测序技术分析源自不同动物的36个弓形虫 DNA样本,结果表明该地区动物感染的弓形虫具有相同的基因型特征。结论:  1.贵州省圈养猪和流浪猫的弓形虫感染情况比较严重,家养狗的感染率则相对较低。  2.动物弓形虫感染以慢性或隐性感染为主,近期感染或急性感染者少见。  3.贵阳及其周边地区所采集的弓形虫DNA样本具有一致的SNP多态性,属于弓形虫不典型基因型,初步分析可能为“Chinese1”型。
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