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目的: 以贵阳及其周边地区猫、猪和狗等动物弓形虫感染的流行病学调查为基础,分离弓形虫虫株,鉴定该地理区域内弓形虫的基因型,为贵州省弓形虫的防治工作提供依据。 方法: 1.采集圈养猪、家养狗和流浪猫的外周血或心脏及脑组织样本。 2.采用 ELISA法检测血浆中的弓形虫抗原 CAG、抗弓形虫抗体 IgG、IgM;PCR检测弓形虫特异性核酸序列529bp。结合弓形虫抗原、抗弓形虫抗体、弓形虫DNA检测,作为判断弓形虫感染的依据。 3.选择经确认弓形虫感染的动物组织样本,采用小鼠腹腔接种分离弓形虫虫株。 4.采用PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)和基因测序技术分析弓形虫DNA样本的SNP(单核苷酸多态性),鉴定研究区域内的弓形虫基因型。 结果: 1.采集猪70头,家养狗107只,流浪猫19只。血清学检测发现,抗弓形虫IgG抗体阳性率猪为70%,狗为20.56%,猫为63.16%;抗弓形虫IgM抗体阳性率猪为0,狗为0.93%,猫为21.05%;弓形虫循环抗原(CAG)阳性率猪为16.88%,狗为13.08%,猫为10.53%。PCR扩增弓形虫529bp特异性片段,其阳性率猪为31.51%,狗为3.74%,猫为52.63%。综合弓形虫抗原、核酸和抗弓形虫抗体的检测结果,动物弓形虫感染率平均为55.61%,其中猪为80%,家养狗为34.58%,流浪猫为84.21%。 2.基于弓形虫血清学和核酸检测结果,用小鼠腹腔接种法分离出5株弓形虫贵州地理株,这些弓形虫株有增殖慢、毒力低、易形成假包囊等生物学特点。 3.多重-巢式多位点PCR-RFLP和基因测序技术分析源自不同动物的36个弓形虫 DNA样本,结果表明该地区动物感染的弓形虫具有相同的基因型特征。结论: 1.贵州省圈养猪和流浪猫的弓形虫感染情况比较严重,家养狗的感染率则相对较低。 2.动物弓形虫感染以慢性或隐性感染为主,近期感染或急性感染者少见。 3.贵阳及其周边地区所采集的弓形虫DNA样本具有一致的SNP多态性,属于弓形虫不典型基因型,初步分析可能为“Chinese1”型。